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SDS-PAGE膠染色

時(shí)間：2016/8/13閱讀：207

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一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較

染色方法靈敏度與質(zhì)譜的兼容性Silver1- 10ng-Silver (MS compatible)10ng+Comassie G -250 or R-250>30ng+antibody(western blot)1ng-

二、考馬斯亮藍(lán)染色

CBB 染色液：0.5%考馬斯亮藍(lán) G250 或 R250;40%甲醇;10%乙酸;將 CBB 溶于甲醇中并不停的攪拌 15min。

加入乙酸與 ddH2O 脫色液：30%甲醇;10%乙酸

染色方法：1. 在搖床上染色 30min;2. 脫色至蛋白點(diǎn)或條帶清晰可見(jiàn);3. ddH2O 洗 3-5 次。

三、膠體考馬氏亮藍(lán)染色 ColloidalCoomassie Staining(Cambridgecentrefor porteomics)

sensitivity = ~100ng

1. 固定：甲醇/ 醋酸/H2O(45:1:54)至少 20min.

2. 染色 12-18hr。

染色液： 17% (w/v) 硫酸銨;34%甲醇;0.5%醋酸;0.1% (w/v) CoomassieG250。

3. 脫色：用 H2O 脫色至蛋白點(diǎn)和背景清晰.



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