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植物維生素E(VE)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-06-23 16:06:09瀏覽次數(shù):220次

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植物維生素E(VE)ELISA試劑盒?產(chǎn)品規(guī)格:96T(人份)/48T(人份)(單孔檢測(cè)分別可以檢測(cè)90份樣本,42分樣本,一般都需要留6個(gè)孔做標(biāo)準(zhǔn)曲線)。
?檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫分析ELISA方法
?有效期: 4 個(gè)月(4℃);8 個(gè)月(-20℃)。 
?保存方法: 2-8℃(頻繁使用時(shí)); -20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))

植物維生素E(VE)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。 
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。 
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。

標(biāo)本的處理 
可用作 ELISA 測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定,有些 則需經(jīng)預(yù)處理。 
● 血清: 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
● 血漿: 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液: 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成, 應(yīng)再次離心。
●細(xì)胞培養(yǎng)上清:
 檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集 上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí),用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
●細(xì)胞: 
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí),對(duì)于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10 秒后,細(xì)胞 就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉 淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進(jìn)行后續(xù)操作。 
●組織標(biāo)本: 
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

相關(guān)產(chǎn)品如下:ZEBRA/HHV4/EBV(Human herpesvirus 4 type 2/epstein-ZIKERrr virus ) 人類皰疹病毒4抗體    0.2ml    子科ZIKER
GTP-CH-1 三磷酸鳥苷環(huán)水解酶抗體    0.2ml    子科ZIKER
GTSE-1(G2 and S phase-expressed protein 1) G2期、S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體    0.2ml    子科ZIKER
A/H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) A型禽流感病毒H5N1-M2蛋白抗體    0.2ml    子科ZIKER
Influenza A Virus Hemagglutinin A/California/04/2009(H1N1) 甲型流感病毒血凝素抗體    0.1ml    子科ZIKER
Influenza A Virus Hemagglutinin A/California/04/2009(H1N1) 甲型流感病毒血凝素抗體    0.1ml    子科ZIKER
Influenza A Virus Hemagglutinin A/California/04/2009(H1N1) 甲型流感病毒血凝素抗體    0.2ml    子科ZIKER
A/H2N2(Influenza A virus ,hemagglutinin H2N2) 兔抗甲2(H2N2)亞型流感抗體(甲2型    0.3ml    子科ZIKER
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Phospho-ZIKERd(Ser155)  磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體    0.1ml    子科ZIKER
phospho-Bcl-xL(Ser62)  磷酸化Bcl-xL(pSer62)抗體    0.1ml    子科ZIKER
Haase(hyaluronidase) 透明質(zhì)酸酶/玻璃酸酶抗體    0.1ml    子科ZIKER
Haase(hyaluronidase) 透明質(zhì)酸酶/玻璃酸酶抗體    0.2ml    子科ZIKER
EAG1(Ether-a-go-go potassium channel 1) 鉀離子通道蛋白EAG1抗體    0.2ml    子科ZIKER
HERG/KCNH2/ERG 特異性鉀離子通道蛋白抗體    0.2ml    子科ZIKER
HA tag HA tag標(biāo)簽抗體    0.1ml    子科ZIKER
HA tag HA tag標(biāo)簽抗體    0.2ml    子科ZIKER
Mouse anti-rabbit IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記小鼠抗兔IgG    0.3ml    子科ZIKER
Mouse anti-rat IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記小鼠抗大鼠IgG    0.3ml    子科ZIKER
Mouse anti-rat IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記小鼠抗大鼠IgM    0.3ml    子科ZIKER
Rabbit anti-MK IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔抗猴IgG    0.3ml    子科ZIKER
HAI-1 (Hepatocyte Growth Factor ActivatorInhibitor 1) 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物抑制因子抗體    0.2ml    子科ZIKER
HDAAg(Human Hepatitis B Surface Antigen Polyclonal Antibody) 山羊抗人乙肝表面抗原抗體(包被    0.1ml    子科ZIKER
HZIKER1(hemoglobin alpha 1) 抗人血紅蛋白α1抗體    0.1ml    子科ZIKER
HZIKER1(hemoglobin alpha 1) 抗人血紅蛋白α1抗體    0.2ml    子科ZIKER
HDAAg(Human Hepatitis B Surface Antigen Monoclonal Antibody) 小鼠抗人乙肝表面抗原抗體(檢測(cè))    0.1ml    子科ZIKER

 

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