200ul小量全血基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）-50次

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。

200ul小量全血基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）-50次儲(chǔ)存事項(xiàng):
1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 為避免降低活性，方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解。因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。
3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
產(chǎn)品介紹：
*的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，zui后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2. 快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成。
3. 多次柱漂洗確保高純度，典型的產(chǎn)量200µl全血可提取出3-6µg，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
4.從十幾個(gè)配方中優(yōu)選出的紅細(xì)胞裂解液配方，裂解快速*，客戶可根據(jù)需要選擇購買。
5.典型的產(chǎn)量200µl全血可提取出3-6µg 基因組DNA。
6. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
注意事項(xiàng)：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.  不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。
3.  需要自備異丙醇。
4. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?br />5. 為了佳效果，使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。
操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：*次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入量無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1.取200μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入1.5ml離心管。
如果全血起始量小于200μl，則用緩沖液BB補(bǔ)足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之間，則后續(xù)操作需要按照比例增加試劑用量。如果起始量介于300μl-1ml之間，則需要*行紅細(xì)胞裂解操作（見本說明書后附錄）。
2. 加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混勻，再加入200μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在70℃放置10分鐘。溶液應(yīng)變清亮（但顏色偏黑色）。
     可選步驟，一般不需要: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可以在加入200μl 結(jié)合液CB 前加20μl RNase A(10mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
3.冷卻后加入210μl無水乙醇或異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。
上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴(yán)重降低產(chǎn)量，必要時(shí)如樣品粘稠不易混勻時(shí)可以渦旋振蕩15秒混勻。
4. 將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。
5. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液。
6. 加入500μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7. 加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8.  將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
9.取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50-100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好，100μl洗脫可分2次洗脫，洗脫效率達(dá)70%），室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是zui小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
10. DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。

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