200μL小量全血DNA提取試劑盒（溶液型）

 試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存18個月不影響使用效果。

200μL小量全血DNA提取試劑盒（溶液型）儲存事項:
1. 環(huán)境溫度低時細胞核裂解液中某些去污劑成份會析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
2. 蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能*溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。
3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒根據(jù)全血特點采用幾個快速步驟提取基因組DNA。首先紅細胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細胞，細胞核裂解液裂解白細胞釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，zui后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
產(chǎn)品特點：
1.從十幾個配方中優(yōu)選出的紅細胞裂解液配方，裂解快速*。
2.不需要使用有毒的苯酚等試劑。
3.快速，簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
4.結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（典型的產(chǎn)量300µl全血可提取出4-15µg），OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可達50Kb-150kb，可直接用于構(gòu)建文庫、PCR、Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
注意事項
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
2. 用戶需自備異丙醇和70％乙醇。
3. 典型的產(chǎn)量300µl全血可提取出5-15µg 基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中白細胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個體差異也可能非常大）。
4. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請索取其它處理量的操作手冊。
5. 本試劑盒可運用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細胞沉淀團很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。
6. 為了佳效果，使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放小于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會嚴(yán)重降低產(chǎn)量。
7. 對于每個樣品提取血量大或者用量大的客戶，可以和我們，我們另外專門準(zhǔn)備有優(yōu)惠的大包裝試劑。
200μL小量全血DNA提取試劑盒（溶液型）操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
1. 吸取900μl 1x紅細胞裂解液（需要先稀釋到1x）到一個1.5ml離心管。
注意：使用前應(yīng)該用去離子水將10x紅細胞裂解液稀釋10倍到1x。
2. 將抗凝全血（使用前回復(fù)到室溫）顛倒混勻后，吸取300μl加到上步裝有紅細胞裂解液的離心管中，顛倒6-8次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。
3. 室溫放置10分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈，混勻數(shù)次幫助裂解紅細胞）。
4. 12,000rpm離心20秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清（注意不要吸到管底的細胞團），留下完整的管底白細胞團和大約10μl的殘留上清。
離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細胞團，也可能有一些紅細胞殘片和白細胞團在一起，但是如果看到的是大部分的紅色細胞團，說明紅細胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入900μl紅細胞裂解液重懸細胞團后重復(fù)步驟3，4。
5. 渦旋振蕩直到白細胞團充分重懸、分散。
白細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，白細胞未打散就加入細胞核裂解液，會導(dǎo)致白細胞不能充分裂解，形成肉眼可見團塊。
6. 加入300μl細胞核裂解液到重懸的白細胞，上下吹打裂解白細胞，或者劇烈渦旋10秒幫助裂解白細胞。
7. 可選步驟，一般不需要: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA，然后冷卻回室溫。
8. 加入100μl蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻25秒。混勻后可能見到一些小的蛋白團塊。
9.13,000rpm離心5分鐘。這時候應(yīng)該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。
10.小心吸取上清（大約300μl）到一個新的1.5ml離心管中。
吸取上清時，注意不要吸到管底和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。
11. 加入等體積的室溫異丙醇（300μl），輕柔顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。
12.12,000rpm離心1分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。
13.加入1ml70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘，倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。
注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。
14.加入100μlDNA溶解液重新溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時），期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA。
DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

200μL小量全血DNA提取試劑盒（溶液型）訂貨相關(guān)須知：
1、如需訂貨可以通過在線銷售人員或:進行確認(rèn)zikerbio，我們會*時間回復(fù)您。
2、如需要開具發(fā)票，請告知相關(guān)銷售人員，您的單位開票抬頭，收貨地址，相關(guān)人員會進行安排。
3、一般款到公司賬號之后，在1-3內(nèi)可以完成發(fā)貨，除特殊需要進口定制的產(chǎn)品，產(chǎn)品質(zhì)檢單和發(fā)票都是隨貨發(fā)送。
4、售后服務(wù)：客戶對產(chǎn)品的包裝數(shù)量和質(zhì)量有異議請在收到貨1-3個工作日進行驗收確認(rèn)，有任何質(zhì)量問題我們會*時間解決您的疑問，但是逾期未提出，視同無異議。
5、部分科研單位如需先提供發(fā)票才能報賬，可以相關(guān)銷售人員先提供發(fā)票，特殊情況可以申請先發(fā)貨，后報賬，為您提供盡可能的便捷。

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