EHA101 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標簽：

EHA101菌株；農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） li福平；Kanamycin（kan）卡那mei素； EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉基因研究；

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產(chǎn)品描述：

EHA101菌株的染色體背景為C58，核基因含li福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA101（pTiBo542DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。pEHA101（pTiBo542DT-DNA）質(zhì)粒攜帶篩選標簽kan，賦予EHA101菌株卡那mei素抗性，適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉基因操作。

我司提供的EHA101化學轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型為C58 (rif^R) Ti pEHA101 (pTiBo542D T- DNA) (kan^R) Nopaline，經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒（壯觀mei素抗性）檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

根癌農(nóng)桿菌介導的轉化原理：

根癌農(nóng)桿菌能在自然條件下趨化性的感染大多數(shù)雙子葉植物或裸子植物的受傷部位，誘導產(chǎn)生冠癭瘤。誘發(fā)冠癭瘤的原因在于根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA含8個左右的基因能在植物細胞內(nèi)表達，指導合成一種非常特殊的化合物冠癭堿，進而引發(fā)轉化細胞癌變；根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒（150～200kb）上的一段T-DNA，隨著農(nóng)桿菌侵染植物傷口進入細胞后，T-DNA脫離質(zhì)粒并整合到植物基因組。因此，將外源基因插入到改造的T-DNA中，借助農(nóng)桿菌的感染作用，從而達到將外源基因轉化并整合進入受體植物的目的。

Ti質(zhì)粒的類型：

根據(jù)根癌農(nóng)桿菌誘導的植物冠癭瘤中所合成的冠癭堿種類不同，Ti質(zhì)粒可分為4種類型：章魚堿型(octopine)、胭脂堿型(nopaline)、農(nóng)桿堿型(agropine)、農(nóng)桿菌素堿型(agrocinopine)或稱為琥珀堿型(succinamopine)。章魚堿和胭脂堿是由氨基酸衍生的冠癭堿，而農(nóng)桿堿和農(nóng)桿菌素堿是屬于單糖衍生的冠癭堿。各種不同類型的Ti質(zhì)粒都具有控制腫瘤誘發(fā)的且物理位置彼此相鄰的T-DNA區(qū)和毒性區(qū)(Vir區(qū))，它們約占Ti質(zhì)粒DNA總長度的1/3。

產(chǎn)品組分：

注意事項

9）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其*融化。

2)        往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入1μg（體積不大于10μl）目的DNA，用手管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。

4)        6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。

【注意】：當平板只含轉化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中加入雙元載體抗生素的同時，再加入20μg/ml li福平時，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml li福平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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