1、瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（Methvlem blue和酸性染料黃色伊紅（EostmY）合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏（美藍(lán)－伊紅Y）染料。

伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無(wú)色部分為陽(yáng)離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍(lán)通常為氯鹽是堿性的，美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽(yáng)離子，無(wú)色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。

2、用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細(xì)胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。 

（2）甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對(duì)染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。

3. 瑞氏染液配制：

（1） 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml,先稱干燥（事先放入溫箱干燥過(guò)夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)， 用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲 即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無(wú)染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一 清潔儲(chǔ)存瓶?jī)?nèi)（用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，直至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲(chǔ)存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲(chǔ)存 3 個(gè)月以上為佳。

（2） 緩沖液：

1） 緩沖液作用：染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察 pH 值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩(wěn)定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定。

2） 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：

　　配方 1 ： 配方 2 ：

　　1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

　　1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

　　H2O（ 新鮮 ） 加至 1000ml

　　置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應(yīng)報(bào)廢。