小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒的制備要點:
1、隨著人們對病原體感染與機體免疫應答的逐步認識,以抗原抗體特異反應為基礎的,更為快速簡便的免疫檢驗方法就應運而生了。
2、試驗中各個操作步驟常出現問題的原因及解決辦法總結于下,希望能夠對一些初步學習者有所幫助:這些難于采用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法檢測的病原體感染診斷治療的要求,迫使人們必須去尋找其他的檢測途徑,直接的或是間接的。
小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒檢測方法概述:
1) 間接法測抗體:將特異性抗原包被在固相載體上,形成固相抗原,加入待檢標本(含相應抗體),其中抗體與固相抗原形成抗原-抗體復合物,再加入酶標記的抗抗體(抗*抗體,亦稱二抗),與上述抗原-抗體復合物結合。此時加入底物,復合物上的酶則催化底物而顯色。
2) 雙抗體夾心法測抗原:將已知的特異性抗體包被在固相載體上,形成固相抗體,加入待檢標本(含相應抗原),抗原與固相抗體結合成復合物,再加入特異性酶標抗體,使之與已形成的抗原-抗體復合物結合,當加入與酶相應的底物時,酶催化底而顯色,根據顏色的有無和顏色的深淺對待測抗原進行定性和定量。
小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒競爭法測抗原:
1、將特異性抗體與固相聯結,形成固相抗體,加入待測標本(含相應抗原)和相應的一定量的酶標抗原,待測標本中的抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,待測標本中抗原含量越高,則與固相抗體結合亦越多,使得酶標抗原與固相抗體結合的機會就越少,甚至沒有機會結合。加入底物后不顯色或顯色很淺,顯色深者為陰性。
2、酶聯免疫試驗的量反應分析:不同的酶聯免疫方法檢測結果的OD值均與標本中待檢的抗原或抗體的量相關(間接法和夾心法正相關,競爭法負相關),因此可以利用OD值對標本中的待檢物質進行定量分析。
3、酶聯免疫試驗質反應分析:ELISA檢測試劑盒根據檢測標本OD值,對標本中待測物質做出有或無的判定(即陽性反應或陰性反應)
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