封閉用脫脂奶粉的常見問題
脫脂奶粉可用于制備微生物培養(yǎng)基；配制ELISA、western等實(shí)驗(yàn)的封閉液。western blot經(jīng)過轉(zhuǎn)印以后，膜上有了蛋白，但是還有很多地方是沒有蛋白覆蓋的，通過脫脂奶粉的蛋白孵育后，這些空白的膜都被脫脂奶粉的蛋白覆蓋了，就防止后續(xù)孵育的一抗和二抗與印跡膜的非特異結(jié)合。在科研實(shí)驗(yàn)中，脫脂奶粉也是常用的生化試劑之一。
關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題
問：western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?
答：脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封閉膜，避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。
問：請(qǐng)問封閉液和抗體稀釋液用BSA 和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?
答：所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子，一般是脫脂奶粉或BSA。對(duì)WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠(yuǎn)較BSA復(fù)雜，如果要做ELISA或者phage display時(shí)候，我們還是用BSA。我推測也沒有依據(jù)說脫脂奶粉就不能用，注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質(zhì)量不同， 脂質(zhì)是會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，即使是用于WesterBlot也要有所挑選。
問：封閉的時(shí)候，為什么一定要用脫脂奶粉?
A：膜上有蛋白缺損點(diǎn)，不用蛋白封蛋白缺損點(diǎn)容易出現(xiàn)非特異染色。也可用BSA 封，效果并不比脫脂奶粉好。
問：western封閉為什么用脫脂牛奶，不用全脂的
答：是因?yàn)槿绻兄镜脑挘橹瑫?huì)與奶粉中的蛋白結(jié)合，導(dǎo)致封閉的時(shí)候蛋白濃度下降，影響封閉的效果，有可能造成封閉不*，所以都會(huì)用脫脂的奶粉來做。
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