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封閉用脫脂奶粉的常見問題

閱讀:7285發(fā)布時(shí)間:2017-5-16

封閉用脫脂奶粉的常見問題

脫脂奶粉可用于制備微生物培養(yǎng)基;配制ELISA、western等實(shí)驗(yàn)的封閉液。western blot經(jīng)過轉(zhuǎn)印以后,膜上有了蛋白,但是還有很多地方是沒有蛋白覆蓋的,通過脫脂奶粉的蛋白孵育后,這些空白的膜都被脫脂奶粉的蛋白覆蓋了,就防止后續(xù)孵育的一抗和二抗與印跡膜的非特異結(jié)合。在科研實(shí)驗(yàn)中,脫脂奶粉也是常用的生化試劑之一。
關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題
問:western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?
答:脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封閉膜,避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。
問:請(qǐng)問封閉液和抗體稀釋液用BSA 和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?
答:所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子,一般是脫脂奶粉或BSA。對(duì)WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠(yuǎn)較BSA復(fù)雜,如果要做ELISA或者phage display時(shí)候,我們還是用BSA。我推測也沒有依據(jù)說脫脂奶粉就不能用,注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質(zhì)量不同, 脂質(zhì)是會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑選。
問:封閉的時(shí)候,為什么一定要用脫脂奶粉?
A:膜上有蛋白缺損點(diǎn),不用蛋白封蛋白缺損點(diǎn)容易出現(xiàn)非特異染色。也可用BSA 封,效果并不比脫脂奶粉好。
問:western封閉為什么用脫脂牛奶,不用全脂的
答:是因?yàn)槿绻兄镜脑挘橹瑫?huì)與奶粉中的蛋白結(jié)合,導(dǎo)致封閉的時(shí)候蛋白濃度下降,影響封閉的效果,有可能造成封閉不*,所以都會(huì)用脫脂的奶粉來做。
 


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