上海研盟生物--Western Blotting實(shí)驗(yàn)問(wèn)題解答
1、膠片上存在反轉(zhuǎn)印象（如：亮的條帶、黑的背景）？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
2、膜上有黃色或棕色的沉積？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
3、在暗室中條帶過(guò)于明亮？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
4、條帶的發(fā)光時(shí)間持續(xù)了至少8小時(shí)？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
5、信號(hào)太弱或沒(méi)有？
原因：
1.太多的HRP積聚導(dǎo)致信號(hào)快速的消退；
2.抗原或抗體的濃度不夠；
3.轉(zhuǎn)印不成功；
4.HRP或其他底物的效價(jià)降低。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.增加其濃度；
3.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件；
4.選擇其他的合適底物。
6、背景高？
原因：
1.HRP濃度過(guò)高；
2.封閉無(wú)效；
3.不適合的封閉試劑；
4.洗滌不充分和洗滌液的量；
5.膠片曝光過(guò)度；
6.抗原或抗體的濃度太高。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.尋找合適的封閉方法；
3.選用其他的封閉試劑；
4.增加洗滌的時(shí)間,次數(shù)；
5.減少曝光時(shí)間；
6.稀釋抗原或抗體。
7、蛋白質(zhì)條帶上有空泡影像？
原因：
1.蛋白質(zhì)沒(méi)有被充分轉(zhuǎn)?。?/p>
2.膜沒(méi)有預(yù)先浸濕；
3.在膠片和膜之間有氣泡。
解決：
1.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件；
2.在轉(zhuǎn)印前充分浸濕；
3.在暴光之前趕走氣泡。
8、膠片上背景彌散？
原因：HRP標(biāo)記的抗體出現(xiàn)了積聚；
解決：稀釋HRP至少10倍。
9、無(wú)特異性條帶？
原因：
1.HRP濃度過(guò)高；
2.SDS促使非特異蛋白質(zhì)條帶黏附在目的蛋白質(zhì)條帶上。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.在操作過(guò)程中不要加SDS。
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