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人肝素輔因子Ⅱ（HCⅡ）ELISA試劑盒

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上海研盟生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡介

上海研盟生物科技有限公司優(yōu)質(zhì)提供“人肝素輔因子Ⅱ（HCⅡ）ELISA試劑盒"，規(guī)格48T/96T,提供免費(fèi)代測服務(wù)，有任何質(zhì)量問題或是檢測不出實(shí)驗(yàn)結(jié)果均可免費(fèi)退換，：.

詳細(xì)介紹

ELISA試劑盒提供免費(fèi)檢測服務(wù)，我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作量和難易程度，雙方協(xié)定實(shí)驗(yàn)周期，保質(zhì)保量完成委托實(shí)驗(yàn)，只收取試劑盒的費(fèi)用，其他輔助試劑全部免費(fèi)。

【友情提示】：產(chǎn)品價(jià)格與說明書請?zhí)砑? 在線詢價(jià)，索要說明書；

【服務(wù)優(yōu)勢】：全程提供ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測
【樣本儲存】：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。部分激素類標(biāo)本需添加*。

ELISA試劑盒問題解析：
1.試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。
2.加樣中可能遇到的問題：在做血清或是血漿用于檢測試劑的時(shí)候，會碰到血清血漿不好分離的情況，這個(gè)時(shí)候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時(shí)，然后在進(jìn)行離心處理
3.洗板時(shí)容易造成誤差：因?yàn)橄窗迨侨斯は吹?，所以判斷什么時(shí)候洗干凈了也是人為判斷的，這個(gè)時(shí)候帶有主觀色彩，所以多清洗幾次，還有就是在洗的時(shí)候孔與孔之間的液體容易交叉流動
4.顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時(shí)間太長，都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進(jìn)行顯色反應(yīng)的時(shí)候，要先查看顯色劑本身的情況
5.終止反應(yīng)：在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快，差生氣泡，造成假陽性結(jié)果。所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒
6.讀板：讀板的時(shí)候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈

產(chǎn)品介紹：

英文名稱：Human heparin cofactor Ⅱ,HCⅡElisa Kit

中文名稱：人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒

貨號：BYS10427B

報(bào)價(jià)：：

種屬：人

規(guī)格：96T/Kit(8*12 strips)、48T/Kit（8*6 strips）

檢測方法：雙抗夾心法、雙抗體一步夾心法

用途：本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中待測物質(zhì)的含量。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

操作步驟
方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ "、“-"號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二　用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒檢測影響因素分析如下：

一、標(biāo)本的影響：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?？赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空*；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。標(biāo)本凝固不全。在工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
二、試劑影響 ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑
靈敏度與特異性存在一定的差別，使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此，選擇高質(zhì)量的上海研盟生物科技有限公司的ELISA試劑盒是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。
三、操作技術(shù)的影響：吸量不準(zhǔn)確，直接影響檢測結(jié)果。因此加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。
溫育影響：抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。
加樣次序影響：有時(shí)我們在加樣過程中，常常會遇到個(gè)別標(biāo)本未離心等情況，為了節(jié)約時(shí)間，往往這時(shí)我們會先加酶結(jié)合物，然后等標(biāo)本分離好后再加標(biāo)本，這樣，竟常常會造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因?yàn)镠BeAb和HBcAb都是競爭抑制法，先加入酶標(biāo)記的抗體，首先與固相載體上的抗原結(jié)合，待加入顯色劑后，因酶的存在而顯色，故呈陰性［3］。
綜上所述，對臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果，要從多方面進(jìn)行分析除試劑因素和操作因素之外，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析，并采取相應(yīng)措施排除干擾作用。

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