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更新時(shí)間：2017-10-20 17:11:13瀏覽次數(shù)：69次
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上海研盟生物科技有限公司優(yōu)質(zhì)提供“人低分子肝素（LMWH）ELISA試劑盒"，規(guī)格48T/96T,提供免費(fèi)代測服務(wù)，有任何質(zhì)量問題或是檢測不出實(shí)驗(yàn)結(jié)果均可免費(fèi)退換，：.
ELISA試劑盒提供免費(fèi)檢測服務(wù)，我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作量和難易程度，雙方協(xié)定實(shí)驗(yàn)周期，保質(zhì)保量完成委托實(shí)驗(yàn)，只收取試劑盒的費(fèi)用，其他輔助試劑全部免費(fèi)。
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【樣本儲(chǔ)存】：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。部分激素類標(biāo)本需添加*。
ELISA檢測試劑盒技術(shù)原理：
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)
產(chǎn)品介紹：
英文名稱：Human low molecular weight heparin,LMWH Elisa Kit
中文名稱：人低分子肝素(LMWH)ELISA試劑盒
貨號(hào)：BYS10428B
報(bào)價(jià)：：
種屬：人
規(guī)格：96T/Kit(8*12 strips)、48T/Kit（8*6 strips）
檢測方法：雙抗夾心法、雙抗體一步夾心法
用途：本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中待測物質(zhì)的含量。
有效期：6個(gè)月
保存條件：2-8℃
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ "、“-"號(hào)表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
人低分子肝素(LMWH)ELISA試劑盒檢測影響因素分析如下：
一、標(biāo)本的影響：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。 標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。 標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。 塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空*；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。 標(biāo)本凝固不全。 在工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
二、 試劑影響 ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑
靈敏度與特異性存在一定的差別，使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此，選擇高質(zhì)量的上海研盟生物科技有限公司的ELISA試劑盒是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。
三、操作技術(shù)的影響：吸量不準(zhǔn)確，直接影響檢測結(jié)果。因此加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。
溫育影響：抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對(duì)溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。
加樣次序影響：有時(shí)我們?cè)诩訕舆^程中，常常會(huì)遇到個(gè)別標(biāo)本未離心等情況，為了節(jié)約時(shí)間，往往這時(shí)我們會(huì)先加酶結(jié)合物，然后等標(biāo)本分離好后再加標(biāo)本，這樣，竟常常會(huì)造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因?yàn)镠BeAb和HBcAb都是競爭抑制法，先加入酶標(biāo)記的抗體，首先與固相載體上的抗原結(jié)合，待加入顯色劑后，因酶的存在而顯色，故呈陰性［3］。
綜上所述，對(duì)臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果，要從多方面進(jìn)行分析除試劑因素和操作因素之外，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析，并采取相應(yīng)措施排除干擾作用。
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