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上海研盟生物科技有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間：2017-11-03 14:30:45瀏覽次數：158次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“HBL-100細胞,人整合SV40基因的上皮細胞"，進口來源，國內保種，活性保證，咨詢：.
【友情提示】：產品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；
產品名稱：HBL-100細胞,人整合SV40基因的上皮細胞
細胞特性
組織來源：腺
培養(yǎng)條件：1640+10% FBS
形 態(tài)：貼壁；上皮細胞樣
含量：>1x10的6次方 個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
基本特性：
C細胞數量：1000000個細胞數
E細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
凍存和復蘇原則就是：慢凍、快解凍。因為細胞內主要成分還是水，在-20℃時細胞中的水結成冰晶，而與水相比，冰的密度小而體積大，會造成細胞器膜、細胞膜的損傷，這樣很容易導致細胞復蘇失敗。
密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代，提供復蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
細胞用途：僅供科研使用。
HBL-100細胞,人整合SV40基因的上皮細胞復蘇方法
1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉/分）5分鐘，取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5．加入培養(yǎng)液適當稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數好，經測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數>1000000個，具有高品質、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術保證產品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。
用途：本產品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療等其他方面。
細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現用現配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.
，體內、外細胞的差異和分化：
1、差異：細胞離體后，失去了神經體液的調節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。
2、分化：體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細胞分化的表現和在體內不同。細胞是否表現分化,關鍵在于是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結構，雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體，這些均屬于細胞分化行為。
注意事項
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
傳代時間：2-3天 3-5天
傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2
細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
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