細(xì)菌L型的培養(yǎng)要在低瓊脂、含血清的培養(yǎng)基中。當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞壁中的肽聚糖結(jié)構(gòu)受到理化或生物因素的直接破壞或合成受抑時，細(xì)菌一般在普通環(huán)境中不能耐受菌體內(nèi)部的高滲透壓而將膨脹死亡；但在高滲環(huán)境下，它們?nèi)钥赡艽婊疃蔀榧?xì)菌細(xì)胞壁缺陷型(bacterial L form)。 L型營養(yǎng)要求與原細(xì)菌相似，但必須提高培養(yǎng)基中的滲透壓。

低瓊脂和血清:

1.低瓊脂：一般固體培養(yǎng)基的瓊脂含量是1.5-2.0%，細(xì)菌多在培養(yǎng)基表面生長。而L型細(xì)菌用的固體培養(yǎng)基的瓊脂含量為0.8-1.0%，較一般固體培養(yǎng)基軟，故又稱軟瓊脂，其原因是L型細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面的生長方式是嵌入式，低濃度瓊脂形成的結(jié)構(gòu)可作為L型細(xì)菌生長的支架。

2.加入10-20%的馬、羊、人血清/血漿，主要是可提供更多的營養(yǎng)物質(zhì)和長鏈脂肪酸，此外還可中和某些毒性物質(zhì)對L型細(xì)菌的毒性作用。

    此外，L型細(xì)菌的某些特征與同樣缺乏細(xì)胞壁的支原體極其相似，如培養(yǎng)條件、生長速度、菌落特征、可通過濾菌器，但前者在去除抗生素等誘因后可以返祖形成細(xì)胞壁。