（一）多克隆抗體的概念
    抗原刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。
抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（Monclone antibody）。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一類抗原決定簇，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。
（二）免疫動物
    供免疫用的動物主要是哺乳動物和禽類，常選擇家兔、綿羊、山羊、馬、騾和豚鼠及小鼠等。動物的選擇常根據(jù)抗體的用途和量來決定，也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如要獲得大量的抗體，多采用大動物；如要是獲得直接標(biāo)記診斷的抗體，則直接采用本動物；如要獲得間接的標(biāo)記診斷用抗體，則必須用異源動物制備抗體；如果難以獲得的抗原，且抗體的需要量少，則可以采用純系小鼠制備；一般實(shí)驗(yàn)室采用的抗體，多用兔和羊制備。
    免疫用的動物選擇適齡的健康雄性動物，雌性動物特別是妊chen動物用于制備免疫抗體則非常不合適，有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對免疫應(yīng)答的個(gè)別差異，免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動物進(jìn)行免疫。
    抗原是多種多樣的，而且千差萬別。就其化學(xué)成分而言，有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清，是選用蛋白質(zhì)抗原，如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的cDNA文庫或免疫印跡的抗血清，選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原，其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同，這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。
    抗原的免疫劑量是依照給予動物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低，不能引起足夠強(qiáng)的免疫刺激，免疫劑量過多，有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內(nèi)，抗體的效價(jià)是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質(zhì)抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言，小鼠的免疫劑量為50μg～400μg/次，大鼠為100μg～1 000μg／次，兔為200μg～1 000μg/次。加強(qiáng)計(jì)量為劑量的1／5～2／5。
    免疫劑量與注射途徑有關(guān)，一般而言，靜脈注射劑量大于皮下注射，而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大，也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小，對家兔而言，采用弗氏*佐劑，則需注射0.5mg～1mg/kg./次，如采用弗氏不*佐劑則注射劑量應(yīng)大10倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得價(jià)的抗血清，宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者，可少量多次。免疫周期短者，應(yīng)大量少次。
    兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果，太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時(shí)間應(yīng)為5~7天，加佐劑者應(yīng)為2周左右。
    注射的Ig純度高，則一般不易引起過敏反應(yīng)，如注射血清，即使是少量，在再次免疫時(shí)，極易引起過敏反應(yīng)，所以一定要采取措施。
（三）佐劑的應(yīng)用
    對可溶性抗原而言，為了增強(qiáng)其免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類型、節(jié)約抗原等目的，常采用加佐劑的方法以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。
1．佐劑的類型 目前實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。
⑴ 弗氏不*佐劑（incomplete Freund's adjuvant,IFA）
羊毛脂 1 份
石蠟油 5 份
混合，高壓滅菌后保存。用時(shí)加熱融化，冷卻至50℃左右，加抗原進(jìn)行乳化處理。
⑵ 弗氏*佐劑（complete Freund's adjuvant,CFA）
弗氏不*佐劑 10ml
卡介苗 10mg～200mg
卡介苗可100℃10min滅活處理。
    初次免疫時(shí)，用弗氏*佐劑，以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。再次免疫時(shí)，一般不用*佐劑，而采用弗氏不*佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí)，一般不用弗氏*佐劑，以免卡介苗的干擾。
⑶ 脂質(zhì)體：是人工制備的類脂質(zhì)的小球體，由一個(gè)或多個(gè)酷似細(xì)胞膜的類脂雙分子層組成，這種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶各種親水的、疏水的和兩性物質(zhì)，他們被包裹在脂質(zhì)體內(nèi)部的水相中，或插入類脂雙分子層或吸附、聯(lián)接在脂質(zhì)體的表面，起到明顯的免疫增強(qiáng)作用。
⑷ 油佐劑 ：采用植物油和礦物油均可，包括豆油、花生油、油菜油等。目前應(yīng)用zui廣的礦物油。
10號白油(石蠟油) 100ml
硬脂酸鋁 2g
司本80 6ml
混合加熱融化，分裝。用時(shí)按下列配方進(jìn)行乳化。
油相 3份
水相（加4%吐溫－80） 1份
先把油相攪拌起來，然后緩慢加入水相乳化。司本是油分散劑，吐溫是水分散劑，均有利于乳化。
2．乳化 將抗原與佐劑混合的過程稱為乳化。乳化的方法很多，可采用研缽乳化；可直接在旋渦振蕩器上乳化；可用組織搗碎器乳化。少量時(shí)，特別是弗氏佐劑與抗原乳化時(shí)，常采用注射器乳化，用兩個(gè)注射器，一個(gè)吸入抗原液，一個(gè)吸入佐劑，兩注射器頭以膠管連接，注意一定扎緊，然后來回抽吸。當(dāng)大量乳化時(shí)，可采用膠體磨進(jìn)行。
    乳化好的標(biāo)志是取一滴乳化劑滴入水中呈現(xiàn)球形而不分散。如出現(xiàn)平展擴(kuò)散即為未乳化好。乳化過的物質(zhì)放置一段時(shí)間（在保存期內(nèi)）出現(xiàn)油水分層也是未乳化好的表現(xiàn)。
    根據(jù)抗原的性質(zhì)、免疫原性和動物的免疫反應(yīng)性來決定免疫途徑、免疫次數(shù)和間隔時(shí)間等。
    免疫途徑包括皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射以及淋巴結(jié)內(nèi)注射等?？乖可伲瑒t一般多采用加佐劑，淋巴結(jié)內(nèi)或淋巴結(jié)周圍、或足掌、或皮內(nèi)、皮下多點(diǎn)注射，如抗原量多，則可采用皮下、肌肉、以至靜脈注射。
    注射間隔時(shí)間 帶佐劑的皮內(nèi)、皮下注射，一般為間隔2～4周免疫一次。不帶佐劑的皮下或肌肉注射，一般為1～2周間隔時(shí)間；肌肉或靜脈免疫的，可5天左右的間隔時(shí)間。
可以把各種注射途徑聯(lián)合起來應(yīng)用，zui終以達(dá)到效價(jià)要求為目的。
（四）抗體的鑒定
    1.抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。
    2.抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力。抗體的特異性高，它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率，求出各自在IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
    如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí)，表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0，即該血清的特異性較好。
    3.抗體的親和力 是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在108～1010/mol，也有多達(dá)1014/mol?？贵w親和力的測定對抗體的篩選，確定抗體的用途，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
（五）抗血清的凍存
    抗血清收獲后，加1/萬硫柳汞或1/萬的疊氮鈉防腐，或加入等量的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下的低溫保存，數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無明顯變化。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。