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PK-15細(xì)胞低血清培養(yǎng)
2018-6-14 閱讀(1282)
PK-15細(xì)胞低血清培養(yǎng)：
一、PK-15細(xì)胞低血清培養(yǎng)：
1、細(xì)胞形態(tài)
在方瓶中使用低血清培養(yǎng)基（MD611）逐代降低血清使用量，進(jìn)行細(xì)胞的低血清馴化適應(yīng)，在低血清培養(yǎng)狀態(tài)下，細(xì)胞具有清晰的輪廓、立體感較強(qiáng)，細(xì)胞更致密，與原培養(yǎng)液的細(xì)胞形態(tài)無(wú)差異。
2、細(xì)胞增殖情況
PK-15細(xì)胞以一定接種密度（3-4×104個(gè)/cm2）接種方瓶進(jìn)行連續(xù)傳代，3d左右細(xì)胞可形成單層或致密單層，需及時(shí)傳代。如下圖所示，使用低血清培養(yǎng)基+5%NBS培養(yǎng)的細(xì)胞與DMEM+10%NBS培養(yǎng)的增殖速率基本無(wú)差別，細(xì)胞3d可增殖6-7倍，細(xì)胞數(shù)可達(dá)2×107個(gè)/T75。
二、MD611低血清培養(yǎng)基的配制方法：
MD611培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的正確配制和使用方法影響細(xì)胞的培養(yǎng)效果，應(yīng)嚴(yán)格按使用說(shuō)明書配制使用。以50L/包規(guī)格低血清培養(yǎng)基為例，應(yīng)按以下程序配制培養(yǎng)基。
1.打開培養(yǎng)基包裝，將培養(yǎng)基全部倒入一容器中。
2.用少量冷卻注射用水（20℃～30℃）涮洗袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基，倒入容器內(nèi)。
3.向容器中加入約40L冷卻注射用水（20℃～30℃），攪拌至培養(yǎng)基*溶解。
4.按使用說(shuō)明書標(biāo)示量加入114.5克碳酸氫鈉，攪拌至*溶解，補(bǔ)加冷卻注射用水（20℃～30℃）至50L，充分混合，用pH計(jì)檢測(cè)，溶液pH應(yīng)為7.2～7.4。
5.按使用量加入血清和抗生素，混合均勻，用0.22μm濾膜正壓過(guò)濾除菌。
6.除菌后培養(yǎng)基，置2℃～8℃避光保存。
三、MD611低血清培養(yǎng)基一些注意事項(xiàng)：
1.不可配制成濃縮液儲(chǔ)存使用。
2.不可用高壓濕熱法進(jìn)行滅菌。
3.不可冷凍儲(chǔ)存，再溶解使用。
4.不可常溫儲(chǔ)存，2～8℃儲(chǔ)存。
5.該培養(yǎng)基中已含谷氨酰胺，由于谷氨酰胺不穩(wěn)定，易分解，產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞敏感的毒性物質(zhì)，故加入血清的*培養(yǎng)液應(yīng)盡快使用完畢。
6.該培養(yǎng)基中所含指示劑酚紅的量是常規(guī)量的一半，故從外觀上看所配溶液顏色較淺，判定pH時(shí)，建議用pH計(jì)測(cè)定pH。
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