人血管生長素(ANG)ELISA  試劑盒

包裝規(guī)格：48T/96T

檢測方法：酶聯(lián)免疫

檢測標(biāo)本：血清、血漿、細胞培養(yǎng)液等

本試劑盒僅供科研使用!

試劑盒組成

人血管生長素(ANG)ELISA  試劑盒  需要而未提供的試劑和器材

1.   酶標(biāo)儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。

2.   洗板機（可調(diào)注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超凈工作臺，生物安全柜，通風(fēng)柜。

4.   高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).

6.   37℃恒溫箱。

7.   低溫離心機。

8.   電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意事項

1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

3． 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

4． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

5． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.  各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

8.  每次試驗測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9.  配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

10.  實驗用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預(yù)熱。

11.  手工洗板應(yīng)注意：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

人血管生長素(ANG)ELISA  試劑盒 樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

1． 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加樣:(詳細操作流程請客服索要說明書）

4． 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。

5． 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6． 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7． 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8． 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

人血管生長素(ANG)ELISA  試劑盒 結(jié)果判斷

1.  每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸）

2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計算。

3．手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析計算結(jié)果。

4．若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9200。

2. 靈敏度：zui小可檢測濃度達，1.05ng/ml。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

8. 檢測范圍： 480ng/ml -3.9ng/ml

問題解答

若實驗效果不好，請及時對顯色結(jié)果拍照，保留所用板條及未使用試劑，并妥善保存，然后我公司為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品：

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作，所有液體組分使用前充分搖勻。

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產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品名稱：人分泌型磷脂酶A2（sPLA2）ELISA試劑盒
英文名稱：Human secreted phospholipase A2,sPLA2 ELISA Kit
包 裝：48T/96T
檢測方法：ELISA酶聯(lián)免疫
檢測標(biāo)本：血清、血漿、細胞培養(yǎng)液等

本試劑盒僅供體外研究使用!
歡迎您“人分泌型磷脂酶A2（sPLA2）ELISA試劑盒”的詳細信息!

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