人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒

包裝規(guī)格：48T/96T

檢測方法：酶聯(lián)免疫

檢測標本：血清、血漿、細胞培養(yǎng)液等

本試劑盒僅供科研使用!

試劑盒組成

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒    需要而未提供的試劑和器材

1.   酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。

2.   洗板機（可調(diào)注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超凈工作臺，生物安全柜，通風(fēng)柜。

4.   高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).

6.   37℃恒溫箱。

7.   低溫離心機。

8.   電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意事項

1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

3． 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

4． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

5． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.  各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

8.  每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9.  配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

10.  實驗用酶標儀應(yīng)嚴格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預(yù)熱。

11.  手工洗板應(yīng)注意：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒   樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

1． 標準品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加樣:(詳細操作流程請客服索要說明書）

4． 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。

5． 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6． 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7． 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8． 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒      結(jié)果判斷

1.  每個標準品和標本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸）

2. 根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計算。

3．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析計算結(jié)果。

4．若標本OD值高于標準曲線上限，應(yīng)適當稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

試劑盒性能

1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9200。

2. 靈敏度：zui小可檢測濃度達，1.05ng/ml。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

8. 檢測范圍： 480ng/ml -3.9ng/ml

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒        其他產(chǎn)品：

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elisa試劑盒常見實驗條件

如何正確使用酶結(jié)合物？ 
1.酶結(jié)合物的稀釋液 
在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附.一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜). 

2.正確稀釋酶結(jié)合物 
酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預(yù)實驗來確定,濃度過高易導(dǎo)致本底偏高,濃度過低則會導(dǎo)致陽性信號的減弱. 
酶結(jié)合物在使用前稀釋,稀釋后的酶結(jié)合物不宜*保存,因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活.