產(chǎn)品名稱:輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒100T圖片
規(guī)格:100T
測(cè)試方法:高效液相色譜法
測(cè)定意義:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD是糖酵解和TCA循環(huán)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài),NADH/NAD比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD降解產(chǎn)物具有非常重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理:
NAD和NADH在254 nm下有吸收峰,利用高效液相色譜法在相應(yīng)波長(zhǎng)下測(cè)定其含量。
需自備的儀器和用品:
高效液相色譜儀、低速離心機(jī)、溶劑抽濾裝置、針頭式過(guò)濾器(水系,50個(gè),0.22μm)、濾膜(水系和有機(jī)系各2個(gè),0.45μm)、C18柱(4.6 ×150 mm)、可調(diào)式移液器、樣品瓶(50個(gè),2mL)、乙腈(120 mL)、甲醇(色譜級(jí),300 mL)、蒸餾水
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒100T圖片試劑使用須知:
(1)請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進(jìn)行安全操作。
(2)通常購(gòu)買(mǎi)試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。
(3)萬(wàn)一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對(duì)于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
(4)購(gòu)買(mǎi)后,請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng);做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),做好必要的安全對(duì)策;對(duì)沒(méi)有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護(hù)用具,小心翼翼進(jìn)行操作。
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒100T圖片樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議 500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲 3s,間隔10s,重復(fù)30 次)8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
我公司提供的輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒100T圖片方法分類:紫外分光光度法、可見(jiàn)分光光度法、微量法、酶法、高效液相色譜法本方法提供代測(cè)服務(wù)!咨詢!
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