喹諾酮類藥物的危害及檢測目的
喹諾酮類藥物主要通過阻斷DNA回旋酶，造成細菌DNA不可逆損害來達到抗菌效果，它們具有抗菌、抗支原體、抗球蟲等作用。因喹諾酮類藥物對多種革蘭氏陰性菌具有良好的殺菌作用，且價格低廉，是養(yǎng)殖中常用到的三大類藥物之一，主要用于預防和治療畜禽及魚類的感染性病狀。食品安全國家標準食品中獸藥較大殘留*(GB31650-2019)中規(guī)定允許使用的喹諾酮類藥物包括：達氟沙星、二氟沙星、恩諾沙星、氟甲喹、惡喹酸、沙拉沙星。雖然允許使用，但是也要規(guī)范用藥，嚴格把控藥物使用劑量、休藥時間、用藥對象等方面內容。因為如果喹諾酮類藥物殘留通過食物進入人體，會造成人類中毒、過敏，甚至致癌、致畸、致突變等嚴重后果，給消費者的健康帶來潛在危害。
檢測項目：喹諾酮類藥物
應用范圍：食品/動物源性食品/豬肉、豬肝、豬腎、牛奶、雞蛋等
方法原理：用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(pH4.0)提取樣品中的喹諾酮類抗生素，經過濾和離心后，上清液經HLB固相萃取柱凈化。高效液相色譜-質譜/質譜測定，用陰性樣品基質加標外標法定量。
前處理儀器：電子天平：感量0.0001g和0.01g；組織勻漿機；旋渦混合器；冷凍離心機(較高轉速大于10000r/min)；聚丙烯離心管(50mL)；酸度計(0.01)；氮吹儀；固相萃取儀
檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源
試樣制備
1、動物肌肉和動物內臟
將現(xiàn)場采集的樣品放入小型冷凍箱中運輸?shù)綄嶒炇?，?10℃以下保存，一周內進行處理。取適量新鮮或冷凍解凍的動物組織樣品去筋、搗碎均勻。
2、牛奶
將現(xiàn)場采集的樣品放入小型冷凍箱中運輸?shù)綄嶒炇遥?10℃以下保存，一周內進行處理。取適量新鮮或冷凍解凍的樣品混合均勻。
3、雞蛋
將現(xiàn)場采集的樣品放入小型冷凍箱中運輸?shù)綄嶒炇?，?10℃以下保存，一周內進行處理。取適量新鮮的樣品，去殼后混合均勻。
前處理方法
1.提取
動物肌肉組織、肝臟、腎臟
稱取均質試樣5.0g(精確到0.1g)，置于50mL聚丙烯離心管中，加入20mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖溶液，1000r/min旋渦混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心5min(溫度低于5℃)，提取三次，合并上清液。
牛奶和雞蛋
稱取均質試樣5.0g(精確到0.01g)，置于50mL聚丙烯離心管中，加入40mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖溶液溶解，1000r/min旋渦混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心10min(溫度低于5℃)，取上清液。
2、凈化
HLB固相萃取柱(200mg,6mL)，使用時用6mL甲醇洗滌、6mL水活化。將提取液以2mL/min~3mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，再用6mL甲醇洗脫并收集洗脫液。洗脫液用氮氣吹干，用1mL0.2%甲酸水溶液溶解，1000r/min旋渦混合1min，用于上機檢測。
注意事項
1、濃度為1mg/mL的喹諾酮標準物質儲備液可在-20℃冰箱中避光保存3個月。
2、該國標方法采用三次提取肉類樣品沉淀物的方式提高回收率。
3、在固相萃取凈化過程中，淋洗后一定擠干小柱，防止洗脫時水進入洗脫液，導致濃縮過程中氮氣吹不干洗脫液，影響定量的準確性。
4、由于該國標方法沒有使用同位素內標來校正回收率，建議使用相應的空白樣品基質提取液配制標準曲線。還可以購置相對應的同位素內標，配合液質儀檢測使用。
5、配制EDTA-Mcllvaine緩沖溶液時，建議配合使用磁力攪拌器，省時省力，使乙二胺四乙酸二鈉*溶解。
6、定容液渦旋混合復溶，有需要時可以超聲30s，提高復溶效率。
