Quick Cell PCR法支原體檢測(cè)試劑盒組成
（1） 支原體引物和內(nèi)參（100次）：206 μL
（2） 陽(yáng)性支原體DNA：50 μL
注意1：本試劑盒提供的支原體引物和內(nèi)參可供至少100次支原體檢測(cè)使用。
2：以下試劑需要自己準(zhǔn)備：（1）滅菌的去離子水；（2）普通的Taq DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液；（3）2.5 mM的dNTP；（4）6× DNA上樣緩沖液。
Quick Cell PCR法支原體檢測(cè)試劑盒使用方法
1.待測(cè)樣品的準(zhǔn)備
為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染，待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品來(lái)源于至少培養(yǎng)3天且匯合度在70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)液上清（貼壁細(xì)胞）。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后，至少讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)。取150 μL上述待測(cè)樣品，在普通臺(tái)式離心機(jī)上1200 rpm (大約150-200 g)離心5 min，取離心后的上清100 μL用于支原體檢測(cè)，丟棄下層剩余的50 μL（含細(xì)胞沉淀）。收集并已經(jīng)離心去除細(xì)胞的待測(cè)樣品如果不立即檢測(cè)，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃基本可以*保存。
注意：本步驟的低速離心是為了去除哺乳動(dòng)物細(xì)胞，以排除其不必要的干擾。所以離心力要嚴(yán)格控制在150-200 g，該離心力下，哺乳動(dòng)物細(xì)胞將被沉淀下來(lái)而支原體不會(huì)。如果錯(cuò)誤使用更高的離心力將可能導(dǎo)致支原體也被離心下來(lái)，從而導(dǎo)致假陰性。
注意事項(xiàng)
1、每次檢測(cè)都應(yīng)該設(shè)有陰性對(duì)照，作用有：（1）陰性對(duì)照會(huì)有一條586 bp的內(nèi)參條帶，這樣可以驗(yàn)證本試劑盒含有的支原體引物和內(nèi)參以及自己準(zhǔn)備的Taq DNA 聚合酶，dNTP等試劑沒(méi)有問(wèn)題；（2）只有當(dāng)陰性對(duì)照的結(jié)果沒(méi)有出現(xiàn)270 bp左右的支原體特異條帶時(shí)，別的樣品的結(jié)果才是可信的。
2、如果586 bp條帶和270 bp左右的條帶都沒(méi)有出現(xiàn)（如圖1，泳道6），在排除PCR試劑的問(wèn)題后（即陰性對(duì)照可以正常擴(kuò)增），說(shuō)明該樣品含有抑制PCR擴(kuò)增的代謝產(chǎn)物。有關(guān)PCR的擴(kuò)增會(huì)被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制的問(wèn)題，Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（貨號(hào)MP0035）的PCR法支原體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中也特別提到了這點(diǎn)，說(shuō)明這是一個(gè)PCR法支原體檢測(cè)中經(jīng)常遇到的問(wèn)題，其強(qiáng)烈建議用試劑盒進(jìn)行DNA提取后再進(jìn)行鑒定。這也是PCR法支原體檢測(cè)的致命弱點(diǎn)。為了克服該問(wèn)題，以下問(wèn)題必須注意：（1）您購(gòu)買(mǎi)的PCR法支原體檢測(cè)試劑盒，其擴(kuò)增產(chǎn)物中必須含有內(nèi)參（Internal Contol）條帶作為對(duì)照【本試劑盒的586 bp條帶就是內(nèi)參條帶】。否則，如果沒(méi)有內(nèi)參作為對(duì)照，即使樣品擴(kuò)增后沒(méi)有支原體特異條帶，你也無(wú)法確定是因?yàn)闃悠反_實(shí)沒(méi)有支原體還是因?yàn)?span style="background-color:transparent">PCR被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制導(dǎo)致的假陰性。（2）如果出現(xiàn)PCR的擴(kuò)增被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制時(shí)，請(qǐng)使用血液基因組DNA抽提試劑盒，抽提支原體DNA后再進(jìn)行PCR鑒定。（3）同時(shí)使用本公司生產(chǎn)的《Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒》進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)嚴(yán)格測(cè)試，該試劑盒的擴(kuò)增不會(huì)被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制。
3、根據(jù)支原體DNA的序列，本試劑盒可以識(shí)別所有100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體，具有廣譜的識(shí)別能力。
4、如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染，本公司提供細(xì)胞支原體清除和預(yù)防試劑。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)) | C4056L1060 | 50 T | -20℃ | 1350 |
Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒 | C4056L1062 | 50 T | -20℃ | 1690 |
| C4056L1064 | 100 T | -20℃ | 1500 |
Quick Cell支原體去除/預(yù)防試劑盒 | C4056L1066 | 2ml | -20℃ | 1200 |
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