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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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抗體穩(wěn)定性好原因及檢測分析
2025-2-24 閱讀(6)
抗體應(yīng)該是蛋白中屬于比較穩(wěn)定的，其Tm值基本上在70度左右。但是這只是跟其它的蛋白相比，作為生物大分子蛋白的本身屬性，抗體還是存在不穩(wěn)定性，會(huì)失活降解。目前抗體在研發(fā)以及醫(yī)療領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，如若其活性變化將造成不可預(yù)知的后果，因此完善的抗體穩(wěn)定性的檢測方法是目前抗體市場bu可或缺，通過檢測確定其可用的條件以及有效期限。
抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩(wěn)定性，主要原因有四個(gè)方面：
1. 抗體純度
高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確?？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
2. 抗體濃度
高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失。撫生抗體產(chǎn)品中，93%的濃度大于0.5mg/ml?？贵w產(chǎn)品濃度普遍大于業(yè)內(nèi)水平。
3. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進(jìn)化的結(jié)果
抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊，形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治"結(jié)構(gòu)，輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個(gè)結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白，大大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
4. 抗體分子的高Tm值
有數(shù)據(jù)表明，在70℃時(shí)抗體分子才開始明顯地去折疊(unfold)，而這一過程之前的變化也具有相當(dāng)?shù)目赡嫘?。也就是說，在室溫下，甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50-60度，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。
目前主要有3種檢測抗體穩(wěn)定性的方法：
1、長期實(shí)驗(yàn)亦可叫Real time：將抗體存放在實(shí)際保存溫度，在不同的時(shí)間點(diǎn)取出后檢測其上述抗體特性，如2個(gè)月檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性，此期限則為其有效的使用和保存期限。
2、加速穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)：將抗體放入高溫存儲(chǔ)條件，如室溫、37℃等，亦是在不同的時(shí)間點(diǎn)取出后檢測其上述抗體特性，一般是1天檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性，根據(jù)其抗體在高溫失活的期限推算其在實(shí)際存放條件下的保存和使用期限。
3、反復(fù)凍融：凍融對(duì)抗體活性會(huì)有較大的影響，因此可通過反復(fù)凍融來檢測抗體的穩(wěn)定性，凍融一次檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性。
此外，嚴(yán)格情況下還需要進(jìn)行運(yùn)輸條件的模擬，測試抗體在其運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性。
對(duì)于長期實(shí)驗(yàn)不一定要做到抗體失活為止，但加速穩(wěn)定和反復(fù)凍融一般要求是要做到抗體失活為止。
