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防止PCR實(shí)驗(yàn)污染的方法

2025-3-11  閱讀(5)

  進(jìn)行PCR操作時(shí),操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程,-大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
 
  一、劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實(shí)現(xiàn)全閉管操作,但無論是否能夠達(dá)到單人單管,均要求實(shí)驗(yàn)操作在三個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行:
 
  l 試劑準(zhǔn)備區(qū)。
 
  l 標(biāo)本制備區(qū)。
 
  l PCR擴(kuò)增區(qū)及分析區(qū)。
 
  切記:任何一間的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區(qū)。
 
  二、分裝試劑:PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在生物安全柜、裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA:
 
  n PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
 
  n 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制;
 
  引物和dNTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存,分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)間,以備發(fā)生污染時(shí)查找原因。
 


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