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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞；AR42J實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
2019-1-25 閱讀(134)
| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 14.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 134次 |
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞；AR42J 實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)：
（1）將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。
（2）將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。
（3）靜置3分鐘。
（4）鏡下觀察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的，然后按下式計(jì)算：
細(xì)胞數(shù)/ml=4大格細(xì)胞總數(shù)/4*10000
注意：鏡下偶見由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞；AR42J 細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量，使的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
