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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

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雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7說明書

2019-8-21  閱讀(134)

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【詳細(xì)說明】

              雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7說明書

冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時(shí),以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

操作步驟  :

 1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。  

 2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。   

3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí)將棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。   觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。  

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。   附:消化液配制方法:   稱取0.25克蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。 



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