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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
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更新時(shí)間：2022-12-10 09:24:14瀏覽次數(shù)：155
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cDNA 第一鏈合成試劑盒10 次 非變性蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)25mg
cDNA 第一鏈合成試劑盒50 次 二氯異溶液，10mg/mL5mL
AMV cDNA 第一鏈合成試劑盒30 次 B 硫酸鹽5mL
miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒25 次 動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒50 次
miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次 動(dòng)植物膜蛋白微量制備試劑盒50 次
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：小鼠前列腺癌細(xì)胞：RM-1
貨號：BJ-X96517
規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：細(xì)胞系
商品介紹：
名稱 RM-1 (小鼠前列腺癌細(xì)胞) 年齡（性別） 男；54歲 組織來源 器官：前列腺； 疾病：正常； 細(xì)胞類型：上皮細(xì)胞 生長特性 貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣 背景描述 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細(xì)胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，建立了RWPE-1細(xì)胞株[PubMed:9214605]。在三維Matrigel培養(yǎng)時(shí)，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA[PubMed:11170142]。當(dāng)與Matrigel或基質(zhì)細(xì)胞混合注射雄性裸鼠時(shí)，RWPE-1細(xì)胞也能形成腺胞[PubMed:11304724]并產(chǎn)生PSA。來源于RWPE-1細(xì)胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞株[PubMed:9214605]和RWPE2-W99細(xì)胞株。另外，用N-甲醇-N-(MNU)處理RWPE-1細(xì)胞，建立了一系列模擬前列腺癌進(jìn)程中不同時(shí)期的成瘤細(xì)胞株。它們是WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26細(xì)胞株。據(jù)提供者報(bào)道，RWPE-1細(xì)胞經(jīng)過檢測，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。 生物安全等級 2 生長培養(yǎng)基 K-SFM＋0.05mg/mL BPE＋5ng/mL EGF＋1% P/S 推薦傳代比例 1:2-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時(shí)間 ~22 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性 No, in nude mice (with or without Matrigel). No, in soft agar. 受體表達(dá)情況 androgen receptor, expressed (upregulated upon exposure to androgen) 抗原表達(dá)情況 kallikrein 3, KLK3 (prostate specific antigen, PSA); Homo sapiens, expressed (upon exposure to androgen); (upon exposure to androgen) 基因表達(dá)情況 cytokeratin 18, cytokeratin 8; Tumor Supressor Gene(s): p53+, pRB+ 保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-11609 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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