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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

聯(lián)系人：: 劉小姐

電話：: 021-52960952

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售后電話：: 15000017673

傳真：: 021-57690166

地址：: 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈

郵編：: 200000

網(wǎng)址：: www.bhsy-e.com/

商鋪：: http://m.hg1112.cn/st582730/

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DAB顯色試劑盒(WB IHC)

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型號(hào)
品牌 其他品牌
廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
所在地 上海市

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更新時(shí)間：2022-06-15 16:17:53瀏覽次數(shù)：251

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【簡單介紹】

編號(hào)	BJ-F0164901

DAB顯色試劑盒(WB IHC)及公司其它各類產(chǎn)品：真皮成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
ERBB2 Others Cynomolgus 食蟹猴 HER2 / ErbB2 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1
中國倉鼠肺細(xì)胞;CHL 卵巢癌細(xì)胞，NIH:OVCAR-3細(xì)胞 L8824細(xì)胞，草魚細(xì)胞
胚皮膚成纖維

中文名稱：DAB顯色試劑盒(WB IHC)
英文名稱：DAB Kit(20×)
產(chǎn)品規(guī)格：20ml|100ml
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164901
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。產(chǎn)品介紹：

?DAB是HRP的常用底物，在辣根過氧化物酶的催化下，DAB會(huì)產(chǎn)生不溶于水和乙醇的棕色沉淀。該試劑盒適用于HRP系統(tǒng)的的免疫組化中的組織切片、細(xì)胞爬片以及Western Blot中PVDF膜、NC膜等的染色。辣根過氧化物酶可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置轉(zhuǎn)變?yōu)楹稚幕衔?，可根?jù)顏色反應(yīng)來確定目的蛋白的位置及表達(dá)情況。

注意事項(xiàng)：

1、工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液2～8℃避光1小時(shí)內(nèi)有效。

2、工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織片或印跡膜。

3、顯色后的組織切片或細(xì)胞爬片可用蘇木精或甲基綠復(fù)染。

4、對(duì)于組織切片，以每張切片用50μl顯色工作液計(jì)算，1ml 20×DAB為400張切片的用量，3ml為1200張切片的用量。

5、為獲得佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

6、顯色后若背景太深，可以考慮延長封閉時(shí)間，避免非特異性染色，或者縮短DAB的顯色時(shí)間；顯色后若顯色太弱或沒有顯色，可以考慮增加一抗或二抗的濃度，或者適當(dāng)延長顯色時(shí)間。

7、DAB為可疑致癌物，使用時(shí)請(qǐng)采取必要的防護(hù)措施。

8、本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體反應(yīng)或人體治療。

操作步驟：

1、DAB顯色工作液配制：根據(jù)需要量，將20×DAB-A和1×DAB-B以1：19的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每毫升DAB-B中滴加1滴(約50μl)DAB-A，混勻即可。

2、顯色：

1)印跡膜顯色：將配制好的工作液滴加在印跡膜上(或?qū)⒂≯E膜傾入到DAB工作液中)即可顯色。顯色時(shí)間一般為1-5分鐘。顯色完畢后，將膜浸入水中，終止反應(yīng)。

2)組織切片或細(xì)胞爬片顯色：加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細(xì)胞爬片上即可顯色，顯色時(shí)間一般為1-5分鐘。顯微鏡下觀察控制顯色時(shí)間，當(dāng)達(dá)到佳顯色效果后，自來水沖洗終止顯色。顯色后的切片經(jīng)復(fù)染、脫水透明，封片后可長期保存。

儲(chǔ)存條件：2～8℃

使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。