土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究 S-NR 的活性
對(duì)合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。
測(cè)定原理
S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；產(chǎn)生的亞
＋
硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的
紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：液體 10mL×1瓶，-20℃保存。
試劑二：液體 4mL×1瓶，-20℃保存。
試劑三：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。
試劑四：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1mL，-20℃保存。
0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用時(shí)將試劑五稀釋100倍，即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測(cè)定操作表
混勻，室溫顯色 20min后，4000g，25℃離心10min，用蒸餾水調(diào)零，540nm下讀取各管吸
光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-NR活性計(jì)算：
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。
S-NR（μmol /d/g）=C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V反總÷W÷T=12×
（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；T：反應(yīng)時(shí)間，
1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.1g。
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