土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關鍵酶。研究 S-NR 的活性
對合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。
測定原理
S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；產生的亞
＋
硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的
紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰，可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：液體 10mL×1瓶，-20℃保存。
試劑二：液體 4mL×1瓶，-20℃保存。
試劑三：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存（如出現(xiàn)結晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。
試劑四：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：標準品儲備液 1mL，-20℃保存。
0.1μmol/mL標準液的配制：用時將試劑五稀釋100倍，即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。
樣品處理：
新鮮土樣自然風干或 37度烘箱風干，過30~50目篩。
測定操作表
混勻，室溫顯色 20min后，4000g，25℃離心10min，用蒸餾水調零，540nm下讀取各管吸
光值。標準管和空白管只需測一次。每個測定管設一個對照管。
S-NR活性計算：
單位的定義：每天每g土樣中產生1μmol NO2ˉ的量為一個S-NR活力單位。
S-NR（μmol /d/g）=C標準×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V反總÷W÷T=12×
（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
C 標準管：標準管濃度，0.1μmol/mL；V 反總：反應體系總體積，0.5mL；T：反應時間，
1h=1/24d； W：樣本質量，0.1g。
