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腫瘤壞死因子檢測試劑盒進行實驗時有哪些條件選擇

閱讀：1078發(fā)布時間：2019-4-10

　　腫瘤壞死因子檢測試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
 
　　1、固相載體的選擇：人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
 
　　2、包被抗體(或抗原)的選擇：人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值*而蛋白量少的濃度。人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
 
　　腫瘤壞死因子檢測試劑盒操作步驟：各試劑在使用前平衡至室溫。
 
　　1、加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，輕輕混勻，酶標板加上蓋，37℃反應(yīng)120分鐘。
 
　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。


腫瘤壞死因子檢測試劑盒

　　3、每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
 
　　4、每孔加檢測溶液B工作液 100ul，37℃，60分鐘，洗板5次，甩干。
 
　　5、依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯)。
 
　　6、依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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