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更新時(shí)間：2018-06-07 16:20:36瀏覽次數(shù)：255次
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非凍型細(xì)菌RNA保存液用傳統(tǒng)的RNA提取方法提取到的細(xì)菌RNA樣品用于細(xì)菌基因表達(dá)譜研究時(shí)，不可避免地會(huì)遇到的一個(gè)問(wèn)題，即得到的RNA材料并不能準(zhǔn)確反映取樣時(shí)細(xì)菌RNA的真實(shí)表達(dá)水平，原因之一是細(xì)菌RNA的半衰期非常短，一般只有幾分鐘，哪怕是經(jīng)過(guò)短暫的離心棄培養(yǎng)基處理過(guò)程，細(xì)菌的RNA水平都會(huì)發(fā)生明顯改變。另一原因是細(xì)菌對(duì)環(huán)境因素的改變非常敏感，溫度、密度、離心力等條件的改變都會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌基因表達(dá)的
非凍型細(xì)菌RNA保存液
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
非凍型細(xì)菌RNA保存液 | 100mL | 490元 |
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用傳統(tǒng)的RNA提取方法提取到的細(xì)菌RNA樣品用于細(xì)菌基因表達(dá)譜研究時(shí)，不可避免地會(huì)遇到的一個(gè)問(wèn)題，即得到的RNA材料并不能準(zhǔn)確反映取樣時(shí)細(xì)菌RNA的真實(shí)表達(dá)水平，原因之一是細(xì)菌RNA的半衰期非常短，一般只有幾分鐘，哪怕是經(jīng)過(guò)短暫的離心棄培養(yǎng)基處理過(guò)程，細(xì)菌的RNA水平都會(huì)發(fā)生明顯改變。另一原因是細(xì)菌對(duì)環(huán)境因素的改變非常敏感，溫度、密度、離心力等條件的改變都會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌基因表達(dá)的迅速改變。上述兩因素的疊加就會(huì)使實(shí)際得到的RNA表達(dá)譜與真實(shí)的RNA表達(dá)譜之間存在巨大的誤差，所以傳統(tǒng)的處理方法不適合于細(xì)菌RNA表達(dá)譜研究。為解決此問(wèn)題，本公司特推出本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)。
1. 能快速滲透到液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌內(nèi)，抑制RNA分子的降解或表達(dá)譜的改變。
2. 操作簡(jiǎn)單，直接將本產(chǎn)品和液體樣品按比例混合即可。
3. 適用于各種細(xì)菌(包括革氏陽(yáng)性和革氏陰性)，也適用于其他微生物樣品，如真菌和藻類等。
4. 重復(fù)性好，效果跟進(jìn)口同類產(chǎn)品相當(dāng)。
5. 處理的樣品可直接用于總RNA提取，也可以長(zhǎng)期保存。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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