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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-08 14:41:11瀏覽次數(shù)：550次
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一站式動物mRNAOUT 構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常 常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly（A）尾 巴，所以可以通過與Oligo（dT）纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA 等）分離開。本產(chǎn)品專門用于從動物組織中提取mRNA，其操作步驟如下
它具有下列特點：
1. 一站式，由柱式動物RN
一站式動物mRNAOUT
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
一站式動物mRNAOUT | 25次 | 990元 |
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構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常 常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾 巴，所以可以通過與Oligo(dT)纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA 等）分離開。本產(chǎn)品專門用于從動物組織中提取mRNA，其操作步驟如下
它具有下列特點：
1. 一站式，由柱式動物RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個產(chǎn)品整合而成，即開 即用，非常方便。 2. 一次可以處理50-100 mg的動 物組織，能得到約10-15 μ g總RNA，從中可得 0.1-0.5 μ g左右的mRNA。
3. Oligo(dT)纖維素吸附能力強，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當于 2000-3000 μ g mRNA。
4. mRNA提取過程操作簡單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱 等繁瑣操作。 5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相， 離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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