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更新時間:2018-06-11 21:08:27瀏覽次數(shù):216次
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一步法單菌落質(zhì)粒 DNAout本產(chǎn)品是在LMAI Bio一步法質(zhì)粒DNAOUT(CAT#70301)基礎(chǔ)上開發(fā)的、能夠從單個菌落快速提取質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它之所以能夠從單個菌落中提取到可以用常規(guī)電泳方法檢測得到的質(zhì)粒DNA是由于一步法細菌裂解技術(shù)能夠使細菌釋放出其幾乎所有的質(zhì)粒DNA。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 不需過夜培養(yǎng)細菌就可以提取質(zhì)粒,能為研究人員節(jié)約一天的寶貴時間。
一步法單菌落質(zhì)粒 DNAout
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
一步法單菌落質(zhì)粒 DNAout | 50次 | 290元 |
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本產(chǎn)品是在LMAI Bio一步法質(zhì)粒DNAOUT(CAT#70301)基礎(chǔ)上開發(fā)的、能夠從單個菌落快速提取質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它之所以能夠從單個菌落中提取到可以用常規(guī)電泳方法檢測得到的質(zhì)粒DNA是由于一步法細菌裂解技術(shù)能夠使細菌釋放出其幾乎所有的質(zhì)粒DNA。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 不需過夜培養(yǎng)細菌就可以提取質(zhì)粒,能為研究人員節(jié)約一天的寶貴時間。
2. 快速,整個過程只需要不到十分鐘(對一個樣品而言)。
3. 一步法裂解細菌,不使用強堿溶液,對DNA損傷小。
4. 得到的質(zhì)粒DNA足夠1-2次電泳或酶切實驗,足夠多次PCR、測序和細菌轉(zhuǎn)化實驗。
5. 適用于高拷貝、中拷貝和低拷貝質(zhì)粒。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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pBIND-GFP
pBIND-Id
pBIND-Id Control
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pBKS-c-Myc (no RI)
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