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液相內(nèi)毒素清除劑

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液相內(nèi)毒素清除劑去除液體生物樣品(包括質(zhì)粒DNA樣品)中污染的內(nèi)毒素(endotoxin)具有重要的臨床意義,因?yàn)閮?nèi)毒素對(duì)原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞和整體動(dòng)物均具有顯著的毒性作用。由于內(nèi)毒素(化學(xué)本質(zhì)為脂多糖,即lipopolysaccharides)是包括E.coli在內(nèi)的革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要組成成分,并且?guī)щ娦愿鶧NA類似,所以從E.coli細(xì)胞中提取的質(zhì)粒DNA和重組蛋白質(zhì)藥物中常常含有大量的

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液相內(nèi)毒素清除劑

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液相內(nèi)毒素清除劑

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去除液體生物樣品(包括質(zhì)粒DNA樣品)中污染的內(nèi)毒素(endotoxin)具有重要的臨床意義,因?yàn)閮?nèi)毒素對(duì)原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞和整體動(dòng)物均具有顯著的毒性作用。由于內(nèi)毒素(化學(xué)本質(zhì)為脂多糖,即lipopolysaccharides)是包括E.coli在內(nèi)的革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要組成成分,并且?guī)щ娦愿鶧NA類似,所以從E.coli細(xì)胞中提取的質(zhì)粒DNA和重組蛋白質(zhì)藥物中常常含有大量的內(nèi)毒素污染,并且很難用用常規(guī)方法(包括硅膠膜吸附,離子交換吸附、凝膠排阻過濾、氯化銫超速離心)去除。本產(chǎn)品就是專門用于高效去除生物樣品中的內(nèi)毒素污染。
1. 簡(jiǎn)單快速,一次處理只需要20分鐘左右,不需要復(fù)雜儀器設(shè)備。
2. 高效,一次處理可以去除90%以上的內(nèi)毒素,經(jīng)過三次重復(fù)抽提可將內(nèi)毒素的水平降低到0.2 EU(endotoxin unit,約0.1 ng LPS)/mL以下。
3. 適用范圍廣,可用于DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其他生物樣品。
4. 不影響DNA和絕大部分蛋白質(zhì)的活性,處理過的質(zhì)粒DNA可用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
5. 既可小規(guī)模使用(在1.5 mL離心管內(nèi)),也可放量使用。
6. 用本產(chǎn)品處理質(zhì)粒DNA后DNA回收率為50%。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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