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綠如藍(lán)染料，PCR級

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產(chǎn)品簡介

綠如藍(lán)染料，PCR級第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會抑制熒光PCR，所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定，并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，具有下列特點(diǎn)：
1. 飽和濃度不抑制PCR反應(yīng)，因此得到的熒光信號更強(qiáng)。

詳細(xì)介紹

綠如藍(lán)染料，PCR級

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊
綠如藍(lán)染料，PCR級	0.1mL	197元

第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會抑制熒光PCR，所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定，并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，具有下列特點(diǎn)：

1. 飽和濃度不抑制PCR反應(yīng)，因此得到的熒光信號更強(qiáng)。

2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強(qiáng)于目前常用的SYBR Green I。

3. 飽和濃度下染料分子沒有機(jī)會發(fā)生移位，熒光強(qiáng)度跟DNA變性程度呈線性關(guān)系，可以用于精細(xì)的Tm測定實(shí)驗(yàn)（如High-resolution melting curve analysis）。

4. 跟目前常用的PCR儀器兼容（包括iCycler、LightCycler、ABI 測序儀）。激發(fā)和發(fā)射光譜跟FAM和SYBR Green I接近，可以使用SYBR Green I的光學(xué)設(shè)置參數(shù)。

5. 不能滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，毒性和致突變性遠(yuǎn)低于SYBR Green I。

6. 使用簡單，加入到PCR溶液中即可。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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