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免RNA提取RT-PCR試劑盒

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更新時間：2018-06-13 14:52:43瀏覽次數(shù)：197次

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產(chǎn)品簡介

免RNA提取RT-PCR試劑盒本產(chǎn)品是一種免RNA提取的RT-PCR的試劑盒，它使用精心優(yōu)化的細胞裂解液直接裂解培養(yǎng)細胞和痕量組織塊，然后直接在細胞裂解液中進行RT，再用cDNA進行PCR或熒光定量PCR。本產(chǎn)品特點如下：
1. 免RNA提取，從細胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR結(jié)果只需3個步驟約3小時，省略了整個RNA提取過程。

詳細介紹

免RNA提取RT-PCR試劑盒

名稱	規(guī)格	價格	手冊
免RNA提取RT-PCR試劑盒	100次	2900元

本產(chǎn)品是一種免RNA提取的RT-PCR的試劑盒，它使用精心優(yōu)化的細胞裂解液直接裂解培養(yǎng)細胞和痕量組織塊，然后直接在細胞裂解液中進行RT，再用cDNA進行PCR或熒光定量PCR。本產(chǎn)品特點如下：

1. 免RNA提取，從細胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR結(jié)果只需3個步驟約3小時，省略了整個RNA提取過程。

2. 靈敏度不低于常規(guī)方法（先提總RNA再進行RT-PCR），不但可以檢測到低拷貝的RNA，還可用于檢測miRNA。

3. 整合了去除基因組DNA的步驟，只檢測RNA，無需擔心基因組DNA的污染。

4. 每次只需要10-10000個培養(yǎng)細胞或含相應(yīng)細胞數(shù)的痕量組織（如LCM樣品），驗證過的細胞包括Hela、CHO、293、COS-7等，但不能用于U937細胞系。

5. 兩步法RT-PCR，后續(xù)使用靈活。得到的cDNA既可用于普通PCR，也可用于基于SYBR的熒光定量PCR，也可用于其他定量PCR（如TaqMan），非常靈活。

6. 有單管操作和多孔板操作兩種模式，前者適用于少量樣品，后者適用于平行處理大量樣品，適用于高通量篩查。

7. 本產(chǎn)品足夠100次50uL體系的RT反應(yīng)和600次30uL體系的PCR反應(yīng)。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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