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高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒

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產(chǎn)品簡介

高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒本試劑盒是基于Inoue方法的、高效快速E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 一步式操作，離心后重懸細(xì)胞即可，非常簡單。
2. 轉(zhuǎn)化率高，轉(zhuǎn)化效率一般都在10E8/ug質(zhì)粒以上。

詳細(xì)介紹

高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊
高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒	20次	詢價(jià)

本試劑盒是基于Inoue方法的、高效快速E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 一步式操作，離心后重懸細(xì)胞即可，非常簡單。

2. 轉(zhuǎn)化率高，轉(zhuǎn)化效率一般都在10E8/ug質(zhì)粒以上。

3. 重復(fù)性好，可用于各種E.coli菌種，包括K12系（如JM109、DH5a等）和B系（如BL21系列菌種）。

4. 適用于低、中、高拷貝的各種質(zhì)粒。

5. 本試劑盒足夠20次制備，每次可以制備可以用50 mL菌液制備80管感受態(tài)細(xì)胞。所得感受態(tài)細(xì)胞在-80℃至少可以保存半年以上。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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