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菌落PCR試劑盒2.0

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更新時(shí)間:2018-06-14 13:49:04瀏覽次數(shù):328次

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產(chǎn)品簡介

菌落PCR試劑盒2.0本產(chǎn)品可用于不經(jīng)過E.coli培養(yǎng)和質(zhì)粒提取而直接從轉(zhuǎn)化子中篩選重組子,其原理是直接利用E.coli菌落作為PCR模板,以識別載體質(zhì)粒或/和插入片段順序的寡核苷酸為引物對重組子進(jìn)行篩查,通過PCR產(chǎn)物的有無和片段的大小來判斷外源DNA片段是否被成功克隆到載體質(zhì)粒之中,使用本產(chǎn)品可以使質(zhì)粒鑒定過程從兩天縮短到幾小時(shí)。

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菌落PCR試劑盒2.0

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菌落PCR試劑盒2.0

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本產(chǎn)品可用于不經(jīng)過E.coli培養(yǎng)和質(zhì)粒提取而直接從轉(zhuǎn)化子中篩選重組子,其原理是直接利用E.coli菌落作為PCR模板,以識別載體質(zhì)?;?和插入片段順序的寡核苷酸為引物對重組子進(jìn)行篩查,通過PCR產(chǎn)物的有無和片段的大小來判斷外源DNA片段是否被成功克隆到載體質(zhì)粒之中,使用本產(chǎn)品可以使質(zhì)粒鑒定過程從兩天縮短到幾小時(shí)。

1. 簡單快速,用戶只需要提供PCR引物和E.coli菌落,不需要細(xì)菌培養(yǎng)和質(zhì)粒提取,整個(gè)篩選過程從一天縮短到2-3小時(shí),節(jié)約時(shí)間和成本。本產(chǎn)品與常用E.coli菌株和載體兼容。既可小規(guī)模篩選,也適用于大規(guī)模篩查。

2. 高靈敏度,既可用于高拷貝質(zhì)粒,也適合于低拷貝質(zhì)粒。

3. 高特異性,本產(chǎn)品采用了十分有效的辦法控制了培養(yǎng)基上殘留質(zhì)粒對PCR的影響,使假陽性率低于5%,而絕大部分同類產(chǎn)品的十分容易出現(xiàn)假陽性。

4. PCR反應(yīng)體系中含有惰性電泳染料,反映完成后可直接上樣電泳,不需另加上樣液。

5. 處理過的菌落樣品低溫長期保存后仍能用于PCR篩查。

6. 性價(jià)比高,價(jià)格更質(zhì)粒提取試劑相當(dāng),但節(jié)約一天時(shí)間。


RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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