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一步式PAGE染液

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更新時(shí)間:2018-06-15 16:32:51瀏覽次數(shù):230次

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產(chǎn)品簡介

一步式PAGE染液本產(chǎn)品是目前較簡單的、靈敏度在納克級的蛋白質(zhì)PAGE染色方法。本產(chǎn)品不需要脫色處理,靈敏度高,使用方便,*可以取代較常用的考馬斯亮藍(lán)G250 (Coomassie Brilliant Blue G250) PAGE染色。
1. 一步染色,可以不需脫色,不必?fù)?dān)心脫色過度,一小時(shí)內(nèi)完成整個(gè)過程。

詳細(xì)介紹

 

一步式PAGE染液

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一步式PAGE染液

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本產(chǎn)品是目前簡單的、靈敏度在納克級的蛋白質(zhì)PAGE染色方法。本產(chǎn)品不需要脫色處理,靈敏度高,使用方便,*可以取代常用的考馬斯亮藍(lán)G250 (Coomassie Brilliant Blue G250) PAGE染色。 
1. 一步染色,可以不需脫色,不必?fù)?dān)心脫色過度,一小時(shí)內(nèi)完成整個(gè)過程。
2. 高靈敏度,比考馬斯亮藍(lán)250更靈敏,接近銀染,達(dá)到n水平。
3. 不需昂貴儀器,肉眼即可觀察結(jié)果,不象其他納克級的染色方法需要貴重的儀器設(shè)備(如SYPRO系列的高靈敏度的熒光染料需要熒光成像系統(tǒng))。
4. 與普通掃描儀,mass spectrometry等兼容,便于保存數(shù)據(jù)和后續(xù)處理。
5. 安全環(huán)保,不需要使用有毒的甲醇和有刺激味道的乙酸。
6. 即開即用,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,可以多次使用。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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