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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-19 11:52:56瀏覽次數(shù)：249次
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質譜兼容型蛋白銀染試劑盒銀染是目前檢測PAGE電泳分離后的蛋白質的較靈敏的方法，MS（質譜）是確定未知蛋白較常用和較快捷的方法，但將銀染得到的蛋白直接用于MS分析有很多問題，其中主要問題是常規(guī)銀染所使用的試劑（包括強氧化劑和醛類）容易使蛋白質發(fā)生化學修飾，這樣MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白質實際的氨基酸信息并不相同。為了使銀染得到的蛋白質可以用于MS分析，為此本公司開發(fā)MS兼容型銀染試劑盒，其特
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒 | 10次 | 1390元 |
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銀染是目前檢測PAGE電泳分離后的蛋白質的靈敏的方法，MS（質譜）是確定未知蛋白常用和快捷的方法，但將銀染得到的蛋白直接用于MS分析有很多問題，其中主要問題是常規(guī)銀染所使用的試劑（包括強氧化劑和醛類）容易使蛋白質發(fā)生化學修飾，這樣MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白質實際的氨基酸信息并不相同。為了使銀染得到的蛋白質可以用于MS分析，為此本公司開發(fā)MS兼容型銀染試劑盒，其特點如下：
1. 跟MS兼容，原理是避免使用能化學修飾蛋白質的試劑，所得蛋白質沒有發(fā)生化學修飾，故可直接用于后續(xù)的MS（包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS）分析。
2. 銀染的靈敏度比考馬斯亮藍染色高100倍左右，可達0.2-0.6 ng蛋白質/條帶。
3. 可用于各種PAGE膠，包括變性PAGE膠（如SDS-PAGE，尿素-PAGE），非變性PAGE膠，IEF膠（等電電泳膠），2D膠等。
4. 四種溶液都是現(xiàn)用現(xiàn)配，實驗結果的可重復性好。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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