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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-20 14:25:04瀏覽次數(shù)：554次
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熱啟動Taq DNA聚合酶熱啟動設(shè)計用于增強(qiáng)DNA擴(kuò)增的特異性、敏感性和產(chǎn)量。使用該酶可在室溫配制反應(yīng)體系，使用非常方便。該酶在室溫下沒有活性，避免形成引物二聚體和非特異性延伸。
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
熱啟動Taq DNA聚合酶 | 100 U | 157元 |
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熱啟動Taq DNA聚合酶設(shè)計用于增強(qiáng)DNA擴(kuò)增的特異性、敏感性和產(chǎn)量。使用該酶可在室溫配制反應(yīng)體系，使用非常方便。該酶在室溫下沒有活性，避免形成引物二聚體和非特異性延伸。從而增加DNA擴(kuò)增的特異性。95℃加熱4分鐘可恢復(fù)酶活性?；罨拿妇哂信c相同的功能：催化5’→3’方向合成DNA、無可檢測的3’→5’校正外切酶活性、具有較低的5’→3’外切酶活性。該酶還具有脫氧核糖核酸酶轉(zhuǎn)移活性，在PCR產(chǎn)物的3’-端多加1個腺嘌呤。活化前檢測不到這些活性。此產(chǎn)品特點是：
高產(chǎn)量擴(kuò)增復(fù)雜模板。
95℃加熱4分鐘可激活酶活性。
PCR特異性高-降低錯配效應(yīng)和減少引物二聚體的生成。
增強(qiáng)的PCR敏感性。
使用方便，室溫配制PCR反應(yīng)體系。
擴(kuò)增產(chǎn)物具有3’-dA突出末端。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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