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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間：2018-06-19 15:15:02瀏覽次數(shù)：324次
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天凈沙DNA甲基化修飾試劑盒本產(chǎn)品是亞硫酸氫鹽DNA修飾試劑盒（CAT#:100922）的升級(jí)版，亞硫酸氫鹽修飾DNA時(shí)要求DNA必須在單鏈狀態(tài)，反應(yīng)還必須在低溫進(jìn)行，常規(guī)的修飾試劑盒由于是在液相進(jìn)行，要在低溫下讓DNA不相互復(fù)性而保持單鏈狀態(tài)非常棘手，所以常規(guī)修飾試劑盒的修飾效率一般都不高。此外，常規(guī)方法要切換反應(yīng)液，有多次沉淀步驟，使得DNA的回收率一般都不超過(guò)50%。為克服這些缺點(diǎn)，本公司開
天凈沙DNA甲基化修飾試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
天凈沙DNA甲基化修飾試劑盒 | 150次 | 1990元 |
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本產(chǎn)品是亞硫酸氫鹽DNA修飾試劑盒（CAT#:100922）的升級(jí)版，亞硫酸氫鹽修飾DNA時(shí)要求DNA必須在單鏈狀態(tài)，反應(yīng)還必須在低溫進(jìn)行，常規(guī)的修飾試劑盒由于是在液相進(jìn)行，要在低溫下讓DNA不相互復(fù)性而保持單鏈狀態(tài)非常棘手，所以常規(guī)修飾試劑盒的修飾效率一般都不高。此外，常規(guī)方法要切換反應(yīng)液，有多次沉淀步驟，使得DNA的回收率一般都不超過(guò)50%。為克服這些缺點(diǎn)，本公司開發(fā)出了此升級(jí)產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1． 用包埋的樣品進(jìn)行所有操作，免去所有沉淀和純化步驟，極大簡(jiǎn)化了操作。
2． 免去了DNA提取過(guò)程，所需實(shí)驗(yàn)材料比常規(guī)方法更少，少幾個(gè)細(xì)胞都可以，極大地節(jié)約了寶貴材料，尤其適用于*材料。
3． 包埋處理后，DNA在整個(gè)操作過(guò)程中都處于適于修飾的單鏈狀態(tài)，極大提高了修飾效率。
4． DNA包埋于包埋塊中，切換反應(yīng)液非常方便，而且DNA不會(huì)丟失，所以終回收率都在90%以上。
5． 適用于實(shí)體材料、懸浮細(xì)胞和純化好的DNA樣品。
6. 本試劑盒足夠制備150多個(gè)10uL包埋塊（如果用純化好的DNA）或25個(gè)10uL包埋塊（如果用懸浮細(xì)胞）。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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