今天氣候晴朗，一掃前幾天陰雨氣候，暖暖的太陽(yáng)讓這傳自西方的白se情人節(jié)更顯溫馨，上海通蔚生物有限公司給我們帶來(lái)夸姣的節(jié)日祝愿。下面咱們言歸正題，跟我們介紹ELISA試劑盒組份和操作過(guò)程。ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。
完整的ELISA試劑盒包括以下各組分：
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物)；
(3)酶的底物；
(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考規(guī)范品和控制血清(定量測(cè)定中)；
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
(6)洗滌液
(7)酶反應(yīng)停止液。
ELISA試劑盒操作過(guò)程：
1. 加規(guī)范品：在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔，順次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣：別離設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl，
然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動(dòng)混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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