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閱讀:266發(fā)布時間:2020-2-20
經(jīng)歷了天然培育基、組成培育基后,無血清培育基和無血清培育成為當(dāng)今細胞培育領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培育可下降出產(chǎn)成本,簡化別離純化步驟,防止病毒污染造成的損害。
無血清培育基是不需求增加血清就可以保持細胞在體外較長時間成長繁殖的組成培育基。可是它們或許包含單個蛋白或很多蛋白組分。
盡管基礎(chǔ)培育基加少數(shù)血清所配制的*培育基可以滿足大部分細胞培育的要求,但對有些試驗卻不合適,如調(diào)查一種成長因子對某種細胞的效果,這時需求掃除其他成長因子的干擾效果。
而血清中或許含有各種成長因子;又如需求測定某種細胞在培育過程中排泄某種物質(zhì)的能力;或者要大規(guī)模的培育某種細胞,以獲得它們的排泄產(chǎn)物。因而研制出無血清培育基一直是生物科學(xué)工作者努力的方針。
無血清培育基的ji本配fang為基本成分為基礎(chǔ)培育基及增加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗出產(chǎn)的細胞在體外培育時,大都呈貼壁成長或兼性貼壁成長;
而當(dāng)其在無血清、無蛋白培育基中成長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式成長。
增加組分包含以下幾大類物質(zhì):
(1)促貼壁物質(zhì):許多細胞必須貼壁才能成長,這種情況下無血清培育基中一定要增加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。
它們?nèi)允侵匾姆至阉匾约氨3终<毎δ艿姆纸庖蜃?,對許多細胞的繁殖和分解,起著重要效果。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分解,這些細胞包含成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。
(2)促成長因子及激素:針對不同細胞增加不同的成長因子。激素也是刺激細胞成長、保持細胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細胞*的,如胰島素。
(3)酶抑制劑:培育貼壁成長的細胞,需求用*消化傳代,在無血清培育基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化效果,達到維護細胞的意圖。*常用的是大豆*;抑制劑。
(4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的增加比較大,可增加培育基的粘度,維護細胞免受機械損害。許多旋轉(zhuǎn)式培育的無血清培育基都含有牛血清白蛋白。
(5)微量元素:硒是zui常見的。
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