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更新時(shí)間：2019-01-10 16:05:41瀏覽次數(shù)：401次
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Bradford蛋白定量試劑盒為客戶供應(yīng)*貼心的服務(wù)，與每一位顧客建立良好的合作關(guān)系，通過不定期進(jìn)行回訪，經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累大量的經(jīng)驗(yàn)，力求做到更好！
Bradford蛋白定量試劑盒產(chǎn)品簡介：
目前世界上較常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法與傳統(tǒng)方法相比，更簡單、更穩(wěn)定、兼容性更好。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，DTT的濃度可高達(dá)5mM。但受高濃度的去垢劑的影響明顯， 故在用Bradford Protein Assay Kit進(jìn)行蛋白定量時(shí)，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用BCA Protein Assay Kit。
Bradford Protein Assay Kit主要由G250、緩沖液等組成，檢測(cè)速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測(cè)。檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml，小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg，待測(cè)樣品體積為1～20μl。在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
Bradford蛋白定量試劑盒操作步驟(僅供參考)：
1、 *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)，按蛋白標(biāo)準(zhǔn):稀釋液=1:9進(jìn)行稀釋，如取蛋白標(biāo)準(zhǔn)10μl稀釋溶解于稀釋液90μl，使其終濃度為0.5mg/ml。注意：蛋白樣品在什么溶液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)用什么溶液稀釋。也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)。
2、 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補(bǔ)足至20μl。
3、 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補(bǔ)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至20μl。
4、 各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min。
5、 酶標(biāo)儀測(cè)定595nm波長處的吸光值，560~610nm之間的波長也可。
6、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
Bradford蛋白定量試劑盒注意事項(xiàng)：
1、 G250染色液回復(fù)至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測(cè)的靈敏度。
2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
3、 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不*，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
4、 需可檢測(cè)560~610nm之間波長的酶標(biāo)儀一臺(tái)，檢測(cè)波長為595nm。
5、 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)闇y(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定應(yīng)每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大G250染色液的用量使總體積不小于小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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