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如何預(yù)防及處理PCR實(shí)驗(yàn)室污染
閱讀:43 發(fā)布時(shí)間:2022-12-10如何預(yù)防及處理PCR實(shí)驗(yàn)室污染
PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用,不過正是由于它靈敏度,極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性。污染,是PCR實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)假陽性、結(jié)果不可信、研發(fā)不可靠的重要推手,PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)將防污染作為日常管理、實(shí)驗(yàn)安排、清潔消毒、實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的核心。實(shí)驗(yàn)室污染分類:
1、樣本間交叉污染
主要是在采(?。拥倪^程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染,或者在核酸提取的過程中,由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。
2、PCR試劑的污染
主要是在PCR試劑配制過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。
3、克隆質(zhì)粒的污染
作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
4、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染
這是PCR反應(yīng)中最主要見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽性結(jié)果。
處理方法:
(1)清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
(2)用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進(jìn)行擦洗,關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位,清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍;
(3)將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時(shí)后,用清水沖洗干凈晾干后使用;
(4)對污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動(dòng)提取儀等,使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理,對生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備,需更換過濾網(wǎng);
(5)用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個(gè)實(shí)驗(yàn)室(地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方)進(jìn)行清潔,并且用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行噴霧消毒(重點(diǎn)部位為操作區(qū)),有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的核酸污染,同時(shí)加大通風(fēng)量(內(nèi)循環(huán)無用,盡可能外循環(huán));
(6)待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后,常用設(shè)備和操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車近距離輻照1小時(shí),實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。

污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn):
設(shè)計(jì)陰性對照組,根據(jù)陰性對照確認(rèn)污染情況??墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證),若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。
為的降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)及日常實(shí)驗(yàn)室管理和操作中,就需要進(jìn)行合理的規(guī)劃以及嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室SOP,把污染的可能性扼殺在搖籃中。