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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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NP-40裂解液
| 參考價 | ￥ 226 |
| 訂貨量 | 1 |
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-07-24 14:03:36瀏覽次數(shù)：253
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- 產(chǎn)品簡介：
1. NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等。
2. 主要成分為 Tris，NaCl，NP-40以及l(fā)eupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍?br />降解。
3. 用得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較
高濃度的去垢劑， 不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度，可以用我們生產(chǎn)
的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。
使用方法:
對于培養(yǎng)細胞樣品：
1. 取適當量的 NP-40混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍
吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。輕輕的搖晃約 5-10 分鐘。充分裂解后，10000-14000g
離心 10 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)操作。
裂解液用量說明： 用于不同規(guī)格標準培養(yǎng)板裂解液容量
板規(guī)格/表面積 試劑容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液用槍吹
打把細胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩 5-10 分鐘以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉
淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g 離心 10 分鐘，取上清，即
可進行后續(xù)操作。
對于組織樣品：
1.手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切
成幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2. 取適當量的 NP-40 裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相應體積的裂解液進行勻漿(如果裂解不充
分可以適當添加更多的裂解液 如果需要高濃度的蛋白樣品 可以適當減少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g 離心 3- 5 分鐘取上清即可進行后續(xù)作。
注：NP-40 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基
因組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上
清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明
膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，
通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
注意事項：
1. 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接
以液體狀態(tài)置-20℃中保存，不要反復凍融。
2. 需自備 PMSF。建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF
