我們?cè)谑褂梅止夤舛扔?jì)測(cè)量吸光度時(shí)為什么讀數(shù)會(huì)不斷變化？是因?yàn)轱@色反應(yīng)還沒(méi)進(jìn)行*還是什么其他原因？其實(shí)不然，靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，儀器是有一定的準(zhǔn)確度和準(zhǔn)確度。
一、樣品的稀釋濃度
樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為使較大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低，或者過(guò)高(超過(guò)光度計(jì)的測(cè)試范圍)。
二、核酸本身物化性質(zhì)
溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精確的檢測(cè)結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測(cè)誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測(cè)量，請(qǐng)使用與懸浮或洗脫樣品時(shí)相同的緩沖液。
三、分光光度計(jì)操作因素
1、使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。
2、儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
3、在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān)。在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
4、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100”點(diǎn)，然后再測(cè)量。
5、比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
會(huì)員1.png)