分光光度計是一款將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器，采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
因為參比溶液對光會存在一定的吸收，所以在比色前通常要將這部分吸收扣除，才更接近被測組分對光的吸收值，這樣才能通過校正曲線來算得被測組分的濃度。分光光度計在進(jìn)行光度測量時，利用參比溶液來調(diào)節(jié)儀器的零點，可以消除由于吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差，并扣除干擾的影響。參比溶液可根據(jù)下列情況來選擇。
分光光度計參比溶液的選擇
1、溶劑
試樣組成簡單，共存組分對測定波長的光無吸收。
2、試劑
顯色劑或其它試劑對測定波長有吸收，按顯色反應(yīng)相同的條件，不加入試樣的試劑。
3、試液
試樣基體溶液在測定波長有吸收，顯色劑自身無色，可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加入顯色劑。
4、平行操作參比
用不含被測組分的試樣，在相同的條件下與被測試樣同時進(jìn)行處理，得到平行操作參比溶液。
如在進(jìn)行某種藥物濃度監(jiān)測時，取正常人的血樣與待測血藥濃度的血樣進(jìn)行平行操作處理，前者得到的溶液即可作為平行操作參比溶液。
注意事項
1、當(dāng)試劑及顯色劑均無色時，可用蒸餾水作參比溶液。
2、顯色劑有顏色，可選擇不加試樣溶液的試劑空白作參比溶液。
3、顯色劑為無色，而被測試液中存在其它有色離子，可用不加顯色劑的被測試液作為參比溶液。
4、顯色劑和試液均有顏色，可將一份試液加入適當(dāng)掩蔽劑，將被測組分掩蔽起來，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其它試劑均按試液測定方法加入，以此作為參比溶液，這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。
5、改變加入試劑的順序，使被測組分不發(fā)生顯色反應(yīng)，可以把此溶液作為參比溶液消除干擾。
