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南京沃博生物科技有限公司

研究丨DSM Prionex®蛋白穩(wěn)定劑與BSA性能大PK

時間:2023-12-18閱讀:369

1、成分:高純度豬真皮膠原蛋白多肽溶液,不含防腐劑、添加劑和穩(wěn)定劑

2、制備工藝:豬皮膠原蛋白在弱酸條件下經(jīng)部分水解后,在145°C下經(jīng)1小時熱處理后,后通過0.2μm的膜進行無菌過濾

3、特性:無酶活性也無已知的酶抑制劑活性,不含免疫反應蛋白,不含脂質(zhì)、多糖或核酸

4、溶解性:易溶于水、稀釋的電解質(zhì)溶液、甘油、DMSO、濃度低于75%的乙醇、以及低于20%飽和度的硫酸銨溶液

5、熱穩(wěn)定性:不會凝膠化且具有熱穩(wěn)定性,在加熱滅菌過程中不會沉淀(在121°C下20分鐘)


保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定的思路

蛋白質(zhì)是免疫診斷產(chǎn)品開發(fā)的基礎,不管是作為原料的抗原抗體、或是大部分的待檢標志物,都是蛋白質(zhì)。在體外診斷試劑研發(fā)中,試劑穩(wěn)定性是經(jīng)常困擾研發(fā)人員的一個大問題。試劑穩(wěn)定性的問題,很大程度可以歸結(jié)為如何在體外環(huán)境下維持蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)防止蛋白質(zhì)活性位點失活的問題。另外保證校準質(zhì)控品的穩(wěn)定,也是獲得準確測試結(jié)果的保證。我們通常使用以下方法來穩(wěn)定蛋白質(zhì):

1、抑菌劑、防腐劑

2、pH值/離子強度

3、蛋白酶抑制劑

4、利用靜電作用防止聚集,如添加表面活性劑

5、添加抗氧化劑

6、加入氨基酸,調(diào)節(jié)溶解度

7、添加惰性化合物,如BSA、Blockmaster®、Prionex®

Prionex®的應用

※ 蛋白質(zhì)/酶的穩(wěn)定劑

※ 蛋白質(zhì)凍干/熱處理的保護劑

※ ELISA等免疫檢測的封閉劑

應用實例



儲存實驗


在含2NIH-U/mlningxuemei的溶液中加分別入Prionex®和BSA,終濃度為1.0%,將溶液保持在37℃。通過檢測凝血時間測定ningxuemei活性,時間延長表示ningxuemei失活。

Prionex®能更有效地提高ningxuemei的儲存穩(wěn)定性,可用于延長蛋白質(zhì)制劑的保質(zhì)期



熱穩(wěn)定性


在含有3BU/mlningxuemei樣巴曲酶的溶液中分別加入Prionex和BSA,終濃度為1.0%,并在沸水浴中加熱。通過檢測凝血時間測定巴曲酶活性,時間延長表示巴曲酶失活。

Prionex®對巴曲酶的酶活性有非常顯著的穩(wěn)定作用



吸附效應


高度稀釋的蛋白質(zhì)溶液在處理過程中,通常因吸附效應(比如被吸附在容器壁、膜、助濾劑或色譜介質(zhì)上)導致顯著的活性損失。
向含有20U/mlyidanbaimei和1.0%穩(wěn)定劑的溶液中加入10%的玻璃粉末。在室溫下?lián)u動后(160rpm),使用顯色底物在405nm處比色測定yidanbaimei活性。

在防止蛋白質(zhì)吸附的應用上,Prionex®與BSA有同等性能



冷凍干燥


冷凍干燥是長時間保存不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的標準方法,然而冷凍干燥過程非常復雜。如果方法和配方未充分優(yōu)化,會經(jīng)常發(fā)生物理和化學變化,導致蛋白變性。 
將含有10μLNIH-U/mlningxuemei和10%穩(wěn)定劑的溶液凍干。復溶后,通過檢測凝血時間測定ningxuemei活性,時間延長表示ningxuemei失活。

在使用Prionex®冷凍干燥的樣品中未觀察到酶活性的降低,而含有BSA的樣品的活性有略微降低(參見上圖)。Prionex®不僅是一種有效的凍干保護劑,還可產(chǎn)生堅固、易于溶解的凍干餅。


產(chǎn)品貨號



除了上述應用實例外,Prionex®還被多家國際ZHIMING校準質(zhì)控品供應商大規(guī)模采用,并已經(jīng)在磁珠抗體偶聯(lián)物保存液、膠乳抗體偶聯(lián)物保存液、生化試劑等應用中得到驗證



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