產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物?；谶@個特點，當pUC系列載體DNA以lacZ 缺欠細胞作為宿主進行轉(zhuǎn)化時，或M13噬菌體載體DNA進行轉(zhuǎn)染時，如果在培養(yǎng)基中加入X-Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色而方便地挑選擇出基因重組體。

常用于β-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。

產(chǎn)品性質(zhì)

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；

2）含有 X-Gal 的培養(yǎng)基 4℃避光保存，須在1周內(nèi)使用。

配制儲存液

稱取200 mg X-Gal于15 mL 離心管，向其中加入10 mL DMF，旋渦震蕩使其充分溶解后于-20℃避光保存，正確操作下，有效期可達5-12個月，如小量頻繁使用，建議分裝成1 mL/管后避光凍存。

藍白斑篩選

1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養(yǎng)基溶液

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右。

2）每毫升培養(yǎng)基內(nèi)加入10 μL20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達到1 mM）；

3）加入適量抗生素；

4）混勻后按照平板大小倒入適量培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，接種細菌于37℃過夜培養(yǎng)。

2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面

1）于無菌超凈工作臺制備平板（如LB 瓊脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準備好的平板上；

【注】：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產(chǎn)生假陽性，因此，為了得到更好結(jié)果，建議后續(xù)操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。

3）37℃ 孵育直至所有液體被吸收（30 min或更長）。接種細菌于37℃過夜培養(yǎng)。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20 oC避光保存。

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