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| 分子量 | 激發(fā)（nm） | 發(fā)射（nm） | 消光系數(shù)（cm -1 M -1） | 量子產(chǎn)率 |
| 863.96 | 555 | 569 | 150000 1 | 0.04 1， |
對于許多免疫組織化學（IHC）應用，傳統(tǒng)的酶促擴增程序足以實現(xiàn)足夠的抗原檢測。但是，有幾個因素限制了這些過程的敏感性和實用性。乙酰胺信號放大（TSA）已被證明是一種特別通用且功能強大的酶放大技術，具有更高的測定靈敏度。TSA基于HRP在低濃度過氧化氫存在下將標記的含酪胺底物轉(zhuǎn)化為可與HRP或附近的laoansuan殘基共價結(jié)合的氧化的高反應性自由基的能力。為了實現(xiàn)zui大程度的IHC檢測，酪胺預先標記有熒光團。通過每個過氧化物酶標記的多個酪酰胺底物的更新而產(chǎn)生的信號放大轉(zhuǎn)化為低豐度靶標的超靈敏檢測以及使用更少量的抗體和雜交探針。在免疫組織化學應用中，源自TSA方法的靈敏度增強可以增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或目標表達水平低而導致的免疫標記弱的問題。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標準Cy3過濾器套件輕松檢測到。從TSA方法獲得的靈敏度增強允許增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或靶標表達水平低而導致的弱免疫標記。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標準Cy3過濾器套件輕松檢測到。從TSA方法獲得的靈敏度增強允許增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或靶標表達水平低而導致的弱免疫標記。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標準Cy3過濾器套件輕松檢測到。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | Cy3 / TRITC濾波器組 |
| 發(fā)射 | Cy3 / TRITC濾波器組 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | Cy3 / TRITC濾波器組 |
修復/透化/阻斷細胞或組織
在封閉緩沖液中添加一抗
加入結(jié)合HRP的二抗
準備酪酰胺工作溶液，并在室溫下在細胞或組織中涂抹5-10分鐘
貓。＃ | 產(chǎn)品名稱 | 單元 | 防爆（nm） | Em（nm） |
11070 | AF 488酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 491 | 518 |
11075 | AF 546酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 554 | 570 |
11082 | AF 594酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 590 | 617 |
11061 | 疊氮基-Cy5酪酰胺 | 1毫克 | 644 | 665 |
11065 | Cy3酪酰胺 | 1毫克 | 555 | 565 |
11066 | Cy5酪酰胺 | 1毫克 | 644 | 665 |
45100 | iFluor TM 488乙酰胺 | 200張幻燈片 | 491 | 514 |
45105 | iFluor TM 555乙酰胺 | 200張幻燈片 | 552 | 567 |
45110 | iFluor TM 647酪酰胺 | 200張幻燈片 | 649 | 665 |
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。
酪酰胺儲備溶液（1000X）：
添加適量的DMSO，制成1-5 mM的酪酰胺儲備溶液。注意：未使用的乙酰胺儲備溶液可在2-8 o C下儲存。
準備工作溶液
酪酰胺工作溶液（1X）：
將1 µL酪酰胺儲備溶液添加到1 mL所選的包含0.003％H 2 O 2的緩沖液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以獲得*性能。注意：應立即使用Tyramide工作溶液，并在使用當天變新鮮。
程序
該方案適用于細胞和組織染色。
細胞固定和通透性
在室溫下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定細胞或組織20分鐘。
用PBS沖洗細胞或組織兩次。
在室溫下用0.1％Triton X-100溶液透化細胞1-5分鐘。
用PBS沖洗細胞或組織兩次。
組織固定，脫石蠟和補液
根據(jù)標準IHC規(guī)程對組織進行脫蠟和脫水處理。根據(jù)需要使用特定溶液/協(xié)議進行抗原修復。
過氧化物酶標記
可選：通過在過氧化物酶淬滅溶液（例如3％過氧化氫）中孵育細胞或組織樣品10分鐘來淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性。在室溫下用PBS沖洗兩次。
可選：如果使用結(jié)合HRP的鏈霉親和素，建議通過shengwusu封閉緩沖液封閉內(nèi)源性shengwusu.
在4°C下用的封閉溶液（例如含1％BSA的PBS）封閉30分鐘。
除去封閉溶液，并添加在推薦抗體稀釋液中稀釋的di一抗體，在室溫下放置60分鐘，或在4°C下放置過夜。
用PBS洗滌3次，每次5分鐘。
將100 µL二級抗體-HRP工作溶液應用于每個樣品，并在室溫下孵育60分鐘。注意：孵育時間和濃度可以根據(jù)信號強度而變化。
用PBS洗滌3次，每次5分鐘。
酪酰胺標記
準備并向每個樣品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室溫下孵育5-10分鐘。 注意：如果觀察到非特異性信號，則可以縮短與Tyramide的孵育時間。您應該在不同的孵育時間點使用陽性和陰性對照樣品優(yōu)化孵育時間?；蛘吣梢栽诠ぷ魅芤褐惺褂幂^低濃度的乙酰胺。
用PBS沖洗3次。
復染和熒光成像
根據(jù)需要對細胞或組織樣本進行復染。AAT提供了一系列核復染色試劑，如表1所示。請按照試劑隨附的說明進行操作。
使用具有防褪色特性的安裝介質(zhì)安裝蓋玻片。
使用適當?shù)倪^濾器設置以可視化來自Tyramide標記的信號。
iFluor™ 488酪胺 iFluor™ 488 tyramide 1 mg Azido-Cy5酪胺 Azido-Cy5 tyramide 1 mg Cy3 酪胺 Cy3 tyramide 1 mg Amplite™熒光法熒光胺蛋白質(zhì)定量試劑盒 *藍色熒光* Amplite™ Fluorimetric Fluorescamine Protein Quantitation Kit *Blue Fluorescence* 1 kit Amplite™熒光法蛋白定量試劑盒*橙色熒光* Amplite™ Fluorimetric Protein Quantitation Kit *Orange Fluorescence* 500 Tests Portelite™熒光法蛋白定量試劑盒 Portelite™ Fluorimetric Protein Quantitation Kit 200 Tests Amplite™比色法葡萄糖氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Colorimetric Glucose Oxidase Assay Kit 1 kit
